Dom » Trudnoća i porod » Određivanje krvne grupe pomoću AVO. antigenski sustav eritrocita

Određivanje krvne grupe pomoću AVO. antigenski sustav eritrocita

Krvne grupe AB0 sustava

Krvne grupe sustava AB0 otkrio je 1900. godine K. Landsteiner, koji je, miješajući eritrocite jednih osoba s krvnim serumom drugih jedinki, utvrdio da se kod nekih kombinacija krv zgrušava, stvarajući pahuljice (reakcija aglutinacije), dok drugi ne. Na temelju tih istraživanja Landsteiner je podijelio krv svih ljudi u tri skupine: A, B i C. Godine 1907. otkrivena je još jedna krvna grupa.

Utvrđeno je da reakcija aglutinacije nastaje kada se antigeni jedne krvne grupe (nazivaju se aglutinogeni) koji se nalaze u crvenim krvnim stanicama - crvene krvne stanice s protutijelima druge skupine (nazivaju se aglutinini) koji se nalaze u plazmi - tekućem dijelu krv. Podjela krvi prema sustavu AB0 u četiri skupine temelji se na činjenici da krv može ali i ne mora sadržavati antigene (aglutinogene) A i B, kao i protutijela (aglutinine) α (alfa ili anti-A) i β. (beta ili anti-B) .

Prva krvna grupa - 0 (I)

Grupa I – ne sadrži aglutinogene (antigene), ali sadrži aglutinine (protutijela) α i β. Označava se 0 (I). Budući da ova skupina ne sadrži strane čestice (antigene), može se transfuzirati svim ljudima. Osoba s ovom krvnom grupom je univerzalni darivatelj.

Druga krvna grupa A β (II)

Grupa II sadrži aglutinogen (antigen) A i aglutinin β (antitijela na aglutinogen B). Stoga se može transfuzirati samo onim skupinama koje ne sadrže antigen B - to su skupine I i II.

Treća krvna grupa Vα (III)

Grupa III sadrži aglutinogen (antigen) B i aglutinin α (protutijela na aglutinogen A). Stoga se može transfuzirati samo onim skupinama koje ne sadrže antigen A - to su skupine I i III.

Četvrta krvna grupa AB0 (IV)

IV krvna grupa sadrži aglutinogene (antigene) A i B, ali sadrži aglutinine (antitijela). Stoga se može transfuzirati samo onima koji imaju istu četvrtu krvnu grupu. Ali, budući da u krvi takvih ljudi nema antitijela koja se mogu držati zajedno s antitijelima unesenim izvana, mogu im se transfuzirati krv bilo koje skupine. Ljudi s četvrtom krvnom grupom univerzalni su primatelji.

Krvne grupe prema ABO sustavu

Metoda određivanja krvnih grupa

Krvna grupa prema ABO sustavu određuje se pomoću reakcije aglutinacije. Trenutno postoje tri načina za određivanje krvnih grupa prema ABO sustavu:

Prema standardnim izohemaglutinirajućim serumima;

Uz pomoć monoklonskih antitijela (zolikloni anti-A i anti-B).

Određivanje krvnih grupa standardnim izohemaglutinirajućim serumima

Bit metode je otkrivanje antigena skupine A i B u ispitivanoj krvi pomoću standardnih seruma. U tu svrhu koristi se reakcija aglutinacije. Test treba provesti u prostoriji s dobrim osvjetljenjem na temperaturi od 15-25 °C.

Za test su Vam potrebni: - Standardni izohemaglutinirajući serumi skupina O (I), A (II), B (III) i AB (IV) dvije različite serije. Serumi za određivanje krvnih grupa izrađuju se od darovane krvi u posebnim laboratorijima. Serumi se čuvaju u hladnjaku na temperaturi od 4 - 8 ° C. Rok valjanosti seruma naveden je na etiketi. Na etiketi je također naznačen titar (maksimalno razrjeđenje seruma pri kojem može doći do reakcije aglutinacije), koji mora biti najmanje 1:32 (za serum B (III) - najmanje 1:16/32). Sirutka bi trebala biti prozirna, bez znakova raspadanja. Radi praktičnosti, standardni serumi su tonirani u određenoj boji: O (I) - bezbojna (siva), A (II) - plava, B (III) - crvena, AB (IV) - svijetlo žuta. Ove boje prate sve oznake na krvnim pripravcima koji imaju grupnu pripadnost (krv, eritrocitna masa, plazma i dr.).

Bijeli porculanski ili emajlirani tanjuri ili drugi mokri tanjuri, označeni prema krvnoj grupi.

Izotonična otopina natrijeva klorida.

Igle, pipete, stakleni štapići (stakla).

Tehnika reakcije.

1. Pod odgovarajućim oznakama krvne grupe na pločicu (ploču) se nanosi serum I, II, III grupe u volumenu od 0,1 ml (jedna velika kap promjera oko 1 cm). Kako biste izbjegli pogreške, primijenite dvije serije seruma, jer jedna od serija može imati nisku aktivnost i ne dati jasnu aglutinaciju. Tako se dobije 6 kapi koje tvore dva reda od po tri kapi sljedećim redoslijedom s lijeva na desno: 0 (I), A (II), B (III).

2. Krv za istraživanje uzima se iz prsta ili iz vene. Sa suhim staklenim štapićem, 6 kapi ispitivane krvi približno veličine glavice pribadače 0,01 ml (mala kap) uzastopno se prenese na ploču u 6 točaka, svaka pored kapi standardnog seruma. Štoviše, količina seruma trebala bi biti 10 puta veća od količine krvi koja se proučava. Zatim se lagano miješaju staklenim štapićima sa zaobljenim rubovima.

Moguća je i jednostavnija tehnika: jedna velika kap krvi nanese se na ploču, zatim se odatle uzme kutom predmetnog stakla i prenese svaka kap seruma, nježno se miješajući s prethodnom. Pritom se krv svaki put uzima čistim kutom čaše, pazeći da se kapi ne pomiješaju.

3. Nakon miješanja kapi, ploča se povremeno protrese. Aglutinacija počinje unutar prvih 10-30 sekundi. Ali promatranje treba provoditi najmanje 5 minuta, jer je moguća kasnija aglutinacija, na primjer, s eritrocitima skupine A 2 (II).

4. U one kapi gdje je došlo do reakcije dodajte jednu kap izotonične otopine natrijevog klorida, nakon čega se procjenjuju rezultati reakcije.

Reakcija aglutinacije može biti pozitivna i negativna.

Uz pozitivnu reakciju, tijekom prvih 10-30 sekundi, u smjesi se uočavaju mala crvena zrnca (aglutinati) vidljiva golim okom, koja se sastoje od slijepljenih crvenih krvnih stanica. Sitna zrna postupno prelaze u veća zrna ili čak u ljuskice nepravilnog oblika. Na povratni udar kap ostaje jednolično crveno obojena.

Rezultati reakcija dviju serija u kapima sa serumom iste skupine moraju se podudarati.

Pripadnost ispitivane krvi odgovarajućoj skupini određuje se prisutnošću ili odsutnošću aglutinacije u reakciji s odgovarajućim serumima.

Kad bi se dali svi serumi pozitivna reakcija, što znači da ispitivana krv sadrži oba aglutinogena - A i B. Ali u takvim slučajevima, kako bi se isključila nespecifična reakcija aglutinacije, potrebno je dodatno kontrolno ispitivanje ispitivane krvi sa standardnim serumom skupine AB (IV). provedeno.

Određivanje krvnih grupa monoklonskim antitijelima

Za određivanje krvnih grupa na ovaj način koriste se monoklinska protutijela koja se dobivaju hibridomskom biotehnologijom.

Hibridom je stanični hibrid koji nastaje stapanjem stanica koštana srž(mijelomi) s imunološkim limfocitom koji sintetizira specifična monoklonska protutijela. Hibridom ima sposobnost neograničenog rasta, karakterističan je za tumorsku stanicu i sposobnost sintetiziranja antitijela svojstvenih limfocitu.

Razvijeni su standardni reagensi-monoklonska protutijela (MCA): anti-A i anti-B kolikloni koji se koriste za određivanje aglutinogena eritrocita. Zolikloni su crveni (anti-A) i plavi (anti-B) liofilizirani prah koji se neposredno prije testa razrjeđuje izotoničnom otopinom natrijevog klorida.

Tehnika.

Anti-A i anti-B solikloni se nanose na bijelu tabletu po jedna velika kap (0,1 ml) pod odgovarajućim oznakama: anti-A ili anti-B. Pored kapi antitijela treba staviti jednu malu kap ispitivane krvi. Nakon miješanja komponenti, reakcija aglutinacije se promatra 2-3 minute. Evaluacija rezultata je vrlo jednostavna.

Određivanje krvne grupe može biti popraćeno pogreškama koje dovode do pogrešnog tumačenja rezultata. Mogu se razlikovati tri glavne skupine pogrešaka: pogreške koje se odnose na loša kvaliteta reagensi; tehničke greške; pogreške povezane sa značajkama Shema za procjenu rezultata određivanja krvnih grupa pomoću monoklonskih protutijela (anti-A i anti-B zolikloni) krvi koja se testira. Prva dva se mogu izbjeći striktnim poštivanjem zahtjeva za serum, reakcijskih uvjeta itd. vlastitih (autoaglutinacija), a istovremeno, eritrociti daju aglutinaciju sa svim serumima, čak i sa serumom grupe AB. Slična pojava opisana je kod niza bolesti: bolesti krvi, splenomegalija, ciroza jetre, zarazne bolesti i dr. Panaglutinacija i autoaglutinacija opisane su i kod zdravih ljudi.

Fenomen panaglutinacije i autoaglutinacije opaža se samo na sobnoj temperaturi. Ako se određivanje pripadnosti skupini provodi na temperaturi od 37 °C, oni nestaju.

Mora se strogo zapamtiti da u svim slučajevima nejasnog ili dvojbenog rezultata krvne grupe treba ponovno odrediti pomoću standardnih seruma iz drugih serija, kao i križnim putem.

66. Metode određivanja krvnih grupa prema avo i rezus sustavu.

Za provođenje studije potrebni su standardni hemaglutinirajući serumi I (O), II (A), III (B), IV (AB), a prve tri varijante seruma treba prikazati u dvije serije.

Serum mora biti prikladan za upotrebu, za to je neophodno provjeriti njegovu usklađenost s rokom valjanosti navedenim na naljepnici seruma, vizualno odrediti njegovo stanje. Serum se ne smije koristiti ako je mutan, sadrži nečistoće, ljuskice, suspenziju, promijenio je boju.

Serum se smatra prikladnim za upotrebu ako je proziran, ampula ima naljepnicu na kojoj su navedena njegova glavna svojstva (serija, rok trajanja, pripadnost grupi, oznaka bojom prema pripadnosti grupi), ampula nije oštećena, nije otvorena.

Potrebna je čista ploča, koja se mora podijeliti na četiri dijela, bilježeći podudarnost sa svakom specifičnom krvnom grupom, igla za scarifier, sterilni pamučni štapići, čisto, suho staklo bez masti i alkohol. Na pločicu, u skladu s oznakom, nanesite kap svakog seruma. Zatim se koža jastučića četvrtog prsta lijeve ruke tretira sterilnim pamučnim štapićem s alkoholom. Uz pomoć scarifier-a, koža se probuši, uklanjajući prvu kap krvi koja je izašla (primjesa alkohola i tkivne tekućine može iskriviti rezultate studije). Sljedeća kap krvi uzima se kutom predmetnog stakla, za svaku kap seruma - čistim kutom stakla. Za istraživanje, kap krvi se dodaje kapi hemaglutinirajućeg seruma u omjeru 10: 1. Zatim, lagano okrećući i tresući ploču, krv se miješa. Aglutinacija se obično pojavljuje u obliku gubitka pahuljica koje se dobro vide. Kako bi se razjasnio rezultat, u kap se dodaje izotonična otopina natrijevog klorida, nakon čega se rezultat procjenjuje s dovoljnom pouzdanošću.

Jedan od preduvjeta za studiju je usklađenost s temperaturnim režimom.

Optimalna temperatura je 20–25 ° C, budući da se već ispod 15 ° C opaža hladna aglutinacija, što oštro narušava specifičnost ovog uzorka, a na temperaturi okoline iznad ovog intervala, brzina reakcije aglutinacije naglo usporava.

Ako se hemaglutinacija dogodi u kapi sa serumima I (O), III (B), ali ne i sa serumom II (A), a rezultat je sličan sa serumima dva seruma, to znači da krv koja se proučava pripada grupa III (B) po ABO sustavu .

Ako se hemaglutinacija javlja u kapi sa serumima I (O), II (A), ali ne i sa serumom III (B), to znači da krv koja se proučava pripada skupini II (A) prema ABO sustavu.

Ali takva je situacija također moguća kada se hemaglutinacija ne dogodi ni s jednim od proučavanih seruma, i s obje serije. To znači da ispitivana krv ne sadrži aglutinogene i pripada skupini I (O) prema ABO sustavu.

Ako dođe do aglutinacije sa svim serumima, i obje serije, to znači da ispitivani serum sadrži oba aglutinogena (A i B) i pripada skupini IV (AB) prema ABO sustavu.

Ekspresna metoda za određivanje krvne grupe prema Rh sustavu. Za studiju je potrebno imati standardni anti-Rhesus serum koji pripada skupini IV (AB) prema ABO sustavu, Petrijevu zdjelicu, izotonsku otopinu natrijevog klorida, 30% otopinu reopoliglucina, čistu, suhu , staklo bez masti. Najprije je potrebno razrijediti standardni antirezus serum otopinom reopoliglucina i nanijeti njegovu kap na Petrijevu zdjelicu. Uz to se u Petrijevu zdjelicu nanese kap seruma IV (AB) skupine koji ne sadrži protutijela. Vađenje krvi provodi se slično kao kod određivanja ABO sustava. Uzima se kap krvi pod kutom predmetnog stakla, dodaje se u kap seruma i lagano miješa. Kap se uzima iz drugog kuta da bi se dodala drugom serumu i također pomiješala. Preliminarni rezultat se procjenjuje nakon 4 minute, zatim se svakoj kapi mora dodati kap izotonične otopine natrijevog klorida, nakon 2 minute procjenjuje se konačni rezultat. Ako se u obje kapi ne uoče ljuskice aglutinacije, to znači da je ispitivana krv Rh negativna. Ako je došlo do aglutinacije s oba seruma, rezultat studije ne može se smatrati pouzdanim. Konačno, ako se aglutinacija dogodi s anti-Rh serumom, ali ne i s drugom, kontrolom, krv se smatra Rh-pozitivnom.

67. Moderna pravila transfuzije krvi po skupinama ABO sustava i Rhesus sustava. Obveze liječnika transfuziologa

Potrebu za infuzijom krvi ili njezinih komponenti, kao i izbor metode i određivanje doze transfuzije, određuje liječnik na temelju klinički simptomi i biokemijskih uzoraka. Liječnik koji obavlja transfuziju dužan je, bez obzira na podatke prethodnih studija i analiza, osobno provesti sljedeće pretrage: odrediti krvnu grupu bolesnika prema ABO sustavu i dobivene podatke usporediti s anamnezom; odrediti krvnu grupu davatelja i usporediti dobivene podatke s podacima na naljepnici spremnika; provjeriti kompatibilnost krvi davatelja i pacijenta; dobiti podatke o biološkim uzorcima. Zabranjeno je transfuzirati krv i njezine frakcije koje nisu ispitane na AIDS, serumski hepatitis i sifilis. Hemotransfuzija se provodi uz pridržavanje svih potrebnih aseptičkih mjera. Infuzija krvi ili njezinih frakcija dopuštena je samo ako se Rh faktor davatelja i primatelja podudara. Ako je potrebno, moguće je dati infuziju Rh-negativne krvi prve skupine osobi s bilo kojom krvnom grupom u volumenu do 0,5 litara (samo za odrasle). Rh-negativna krv druge i treće skupine može se transfuzirati osobi s drugom, trećom i četvrtom skupinom, bez obzira na Rh faktor. Osobi s četvrtom krvnom grupom pozitivnog Rh faktora može se dati krv bilo koje skupine. Masa eritrocita Rh-pozitivne krvi prve skupine može se unijeti u bolesnika s bilo kojom skupinom s Rh-pozitivnim faktorom. Krv druge i treće skupine s Rh pozitivnim faktorom može se uliti osobi s četvrtom Rh pozitivnom grupom. Na ovaj ili onaj način, test kompatibilnosti je obavezan prije transfuzije. Kada se u krvi otkriju rijetki specifični imunoglobulini, potreban je individualni pristup izboru krvi i specifičnim testovima kompatibilnosti.

Testovi kompatibilnosti krvi davatelja i primatelja prije transfuzije.

Konačno, ako se ustanovi da se krv davatelja i krv primatelja podudaraju u sustavima ABO i Rhesus, potrebno je provesti test biološke kompatibilnosti za transfuziju. Provodi se od samog početka transfuzije krvi. Nakon spajanja sustava za transfuziju krvi, otvorite stezaljku i ubrizgajte približno 20 ml krvi darivatelja u mlazu, zatim zatvorite stezaljku i pažljivo promatrajte reakciju pacijenta 3 minute. Biološka nekompatibilnost krvi davatelja i bolesnika u kliničkoj praksi je rijetka, ali može biti vrlo opasna za zdravlje primatelja. O njegovoj prisutnosti možemo govoriti ako postoji hiperemija lica, psihomotorna agitacija, bolesnik je sklon ustati, neprimjereno ponašanje, tahikardija i tahipneja, smanjenje krvni tlak. Pojačano disanje može se kombinirati s osjećajem nedostatka zraka. Takva reakcija je apsolutna kontraindikacija za transfuziju krvi ovog darivatelja ovom primatelju. Međutim, to ne isključuje korištenje drugih dijelova darovane krvi te osobe drugim pacijentima. Ako biološki test nije popraćen pojavom slične reakcije kada se ponovi dvaput, smatra se prikladnim za transfuziju. Transfuzija se nastavlja, ali je cijelo vrijeme potrebno pažljivo pratiti stanje primatelja, njegov krvni tlak, tjelesnu temperaturu, opće stanje, frekvenciju i ritam disanja, procijeniti učestalost i kvalitetu pulsa, obratiti pozornost na subjektivne osjećaji pacijenta: osjećaj vrućine, osjećaj nedostatka zraka, svrbež kože, bol u lumbalnoj regiji, zimica, itd. Takvo praćenje stanja pacijenta provodi se unutar 4 sata nakon transfuzije krvi, a ako nakon toga ako nema reakcije na transfuziju, tada se transfuzija krvi smatra uspješnom, provedenom bez komplikacija.

Određivanje krvne grupe AB0 sustava

Koristite standardni serum I II III IV serije krvne grupe 2.

Stavite pregaču, masku, naočale, rukavice, rukave.

Metodologija.

1. Na čistu, suhu, nemasnu ploču nakapa se jedna kap standardnih seruma 2 serije (6 kapi). Svaki serum se ukapa zasebnom pipetom. Pipete su označene i nalaze se u bočicama s fiziološkom otopinom.

2. Uz kap standardnog seruma štapićem ili posebnom pipetom nanese se kap krvi (omjer serum-krv 10:1).

3. Kapi se temeljito izmiješaju zasebnim štapićima.

4. Protresite ploču i promatrajte rezultate 5 minuta. Nakon 3 minute, kako bi se isključila lažna aglutinacija, dodajte kap fiziološke otopine i nastavite s praćenjem.

Definicija rezultata.

Serumi svih skupina nisu dali reakciju - ispitivana krv pripada skupini 0 (I)

Serumi skupine 0 (I) i B (III) dali su pozitivnu reakciju, serum skupine A (II) nije izazvao aglutinaciju eritrocita - krv koja se proučava pripada skupini A (II)

Serumi skupine O (I) i A (II) dali su pozitivnu reakciju, serum skupine B (III) nije dao reakciju - krv pripada skupini

Serumi svih skupina dali su pozitivnu reakciju - krv se može pripisati skupini AB (IV). ali samo ako pri kontroli ispitivanih eritrocita standardnim serumom skupine AB (IV) nema reakcije aglutinacije. Pozitivna aglutinacija sa serumom AB (IV) znači postojanje nespecifične aglutinacije.

Određivanje krvne grupe ABO sustava monoklonskim antitijelima.

to moderna metoda određivanje krvne grupe ABO monoklonskim reagensima (zolikloni anti-A i anti-B).

Način određivanja: Nositi pregaču, masku, rukavice, narukvice

1. na pločicu u dvije ćelije nakapajte po 1 kapletsoliklona anti-A i anti-B

2. Uz kapi protutijela stavlja se ispitna krv u omjeru serum-krv 10:1.

3. Pomiješajte reagense zasebnim staklenim štapićima.

4. Promatrajte rezultat 2,5 minute.

Definicija rezultata:

Ne postoji aglutinacija ni s anti-A zoliklonom ni s anti-B-zoliklonom.

krv pripada O(I) grupi

Aglutinacija se opaža samo s anti-A zoliklonom - krv pripada skupini A (II)

Aglutinacija se opaža samo s anti-B zoliklonom - krv pripada skupini B (III)

Aglutinacija se opaža i s anti-A zoliklonom i s anti-B zoliklonom - krv pripada AB (IV) skupini

5. Uzorci prije transfuzije krvi.

Nosite masku, zaštitne naočale, pregaču, rukavice.

Uzme se 5 ml krvi iz vene pacijenta, centrifugira se i dobije serum.

A) Test individualne kompatibilnosti: na pločicu staviti 2-3 kapi seruma i dodati kap krvi davatelja (10:1). Krv se pomiješa sa serumom suhim staklenim štapićem, pločica se lagano protrese i promatra rezultat.

Rezultat: nema aglutinacije - krv je kompatibilna, postoji aglutinacija - krv nije kompatibilna.

B) Test Rh kompatibilnosti:

Na čistu epruvetu napišite prezime, ime, patronim primatelja i njegovu krvnu grupu, kao i broj bočice darivatelja.

Na dno epruvete dodati Pasteurovom pipetom 2 kapi seruma primatelja, 1 kap krvi davatelja i 1 kap 33% otopine poliglucina.

Dobivenu smjesu u epruveti promiješajte i nagnuvši epruvetu u vodoravni položaj, okrenite je tako da se sadržaj rasporedi po stijenkama epruvete u njezinoj donjoj trećini.

Nakon 5 minuta dodajte 2-3 ml izotonične otopine natrijeva klorida u epruvetu i promiješajte sadržaj okretanjem epruvete 2-3 puta.

Proizlaziti:

1. Prisutnost aglutinacije eritrocita - krv davatelja je nekompatibilna s krvlju pacijenta.

2. Nema znakova aglutinacije – krv je kompatibilna.

C) biološki uzorak.

Tehnika:

Mlazom transfuzirajte 10-15 ml krvi (eritrocitna masa, plazma), zatim promatrajte bolesnika 3 minute. U nedostatku kliničkih manifestacija reakcije ili komplikacija (povećan broj otkucaja srca, disanje, otežano disanje, otežano disanje i crvenilo lica itd.), 10-15 ml krvi (eritrocitna masa, plazma itd.) ponovno se ubrizgava i unutar 3 minute promatrati pacijenta. Isti postupak se ponavlja 3. put. Izostanak odgovora kod bolesnika nakon 3-struke kontrole temelj je za nastavak transfuzije. 10-15 ml krvi ostavi se u bočici i čuva 1 dan u hladnjaku.

6. Nakon transfuzije krvi primatelj ostaje u krevetu 2 sata i promatra ga liječnik. Njemu se svaki sat mjeri tjelesna temperatura i krvni tlak, te se ti pokazatelji upisuju u povijest bolesti. Prati se prisutnost mokrenja i normalna boja urina. Sljedeći dan nakon transfuzije, svakako proizvesti opća analiza urin i krv. Indikacija za transfuziju krvi upisuje se u povijest bolesti te se sastavlja transfuzijski protokol koji sadrži sljedeće podatke:

– Puno ime i prezime pacijenta

Krvna grupa i Rh-pripadnost bolesnika

Podaci iz putovnice boca ili komponenti krvi, prezime i inicijali darivatelja, krvna grupa i Rh pripadnost, broj boce, datum pripreme.

Rezultat kontrolnog određivanja krvne grupe bolesnika

Rezultati kontrolnog određivanja skupine svake bočice krvi i njezinih sastojaka.

Rezultati testova kompatibilnosti krvi davatelja i primatelja na sobnoj temperaturi

Metoda ispitivanja temperaturne kompatibilnosti i rezultati

Rezultati bioloških uzoraka

Stanje bolesnika tijekom i nakon transfuzije.

/ 29

29 Metode određivanja krvnih grupa i Rh faktora. Prevencija mogućih grešaka

Određivanje krvnih grupa standardnim serumima. Jedna velika kap standardnog seruma skupina 0(1), A(P), V(III) dviju različitih serija svake skupine uzastopno se pipetama nanosi u jažice tablete za određivanje krvnih grupa. Zatim se na svaku žarulju nanese kap ispitivane krvi, 5 do 10 puta manje seruma. Koristeći suhe staklene štapiće ili protresanjem ploče, miješaju se standardni serumi i ispitivana krv. Nakon 5 minuta procijenite rezultat (tablica 2).

tablica 2

Određivanje krvnih grupa standardnim serumima

Provjerena krvna grupa	Standardni serumi

Određivanje krvnih grupa standardnim eritrocitima. Velike kapi krvne plazme nanose se na jažice tablete. Mala kap standardnih eritrocita skupina 0(1), A(II), B(III) uzastopno se nanosi uz svaku kap plazme. Kapi se miješaju protresanjem ploče. Nakon 5 minuta svakoj kapi smjese doda se 1 kap fiziološke otopine i rezultat se uzme u obzir.

Tablica 3

Određivanje krvnih grupa pomoću standardnih crvenih krvnih stanica

Provjerena krvna grupa	Standardni eritrociti

Definicija Rh faktora. Na dno suhe epruvete nanese se 1 velika kap univerzalnog anti-rezus reagensa, zatim se doda ista kap ispitivane krvi. Nakon mućkanja epruveta, antirezus serum i krv se miješaju 5 minuta uz stijenke epruvete, nakon čega se doda 5-7 ml fiziološke otopine. Prisutnost aglutinacije ukazuje na prisutnost Rh faktora.

Određivanje krvnih grupa pomoću koliklona. Anti-A, anti-B i anti-AB tsolikloni su dizajnirani za određivanje ljudskih krvnih grupa ABO sustava u reakcijama izravne hemaglutinacije i koriste se umjesto ili paralelno s poliklonalnim imunološkim serumima.

Monoklonska anti-A i anti-B antitijela proizvode dva mišja hibridoma i pripadaju imunoglobulinima klase M. Kolikloni se pripremaju iz ascitne tekućine miševa koji nose anti-A i anti-B hibridome. Zoliclone anti-AB je mješavina monoklonskih anti-A i anti-B antitijela.

Tsoliklons je dostupan u tekućem obliku u bočicama od 5-10 ml. Tsoliklon anti-A - žuta boja, anti-B - plavi, anti-AB - bezbojni. Natrijev azid se koristi kao konzervans.

Tehnika određivanja krvnih grupa. Određivanje se vrši u nativnoj krvi koja je uzeta kao konzervans; u krvi uzetoj bez konzervansa, uključujući i iz prsta. Koristi se metoda izravne hemaglutinacije na ploči ili tableti, određivanje se vrši u prostoriji s dobrim osvjetljenjem na temperaturi od 15 - 25 X.

Anti-A, anti-B i anti-AB colikloni se na ploču ili tabletu nanose pojedinačnim pipetama po jedna velika kap (0,1 ml) ispod odgovarajućih natpisa.

Uz kapi antitijela stavlja se jedna mala kap ispitivane krvi (0,01 - 0,03 ml).

Pomiješajte krv s reagensom protresanjem ploče.

Tijek reakcije s tsoliklonom promatrajte vizualno uz lagano ljuljanje tablete tijekom 3 minute. Aglutinacija eritrocita s koliklonima obično se događa u prvih 3 do 5 sekundi, ali promatranje treba provoditi 3 minute zbog kasnije pojave aglutinacije s eritrocitima koji sadrže slabe varijante A ili B antigena.

Rezultat reakcije u svakoj kapi može biti pozitivan ili negativan. Pozitivan rezultat se izražava u aglutinaciji (lijepljenju) crvenih krvnih stanica. Aglutinati se vide kao mali crveni agregati koji se brzo miješaju u velike ljuskice. Uz negativnu reakciju, kap ostaje jednoliko obojena crvenom bojom, u njoj se ne otkrivaju aglutinati.

Tumačenje rezultata reakcije aglutinacije s koliklonima prikazano je u tablici. četiri.

Stol 4

Određivanje krvnih grupa pomoću koliklona

Provjerena krvna grupa	Standardni eritrociti

Napomena: znak (+) označava prisutnost aglutinacije, znak (-) označava njenu odsutnost.

Uz pozitivan rezultat reakcije aglutinacije sa svim zveckajućim koliklonima, potrebno je isključiti spontanu nespecifičnu aglutinaciju ispitivanih eritrocita. Da biste to učinili, pomiješajte na ravnini 1 kap proučavanih eritrocita s kapi fiziološke otopine. Krv se može dodijeliti skupini AB (IV) samo u odsutnosti aglutinacije eritrocita u fiziološkoj otopini.

Određivanje Rh faktora pomoću tsoliklona. 1 velika kap anti-D-super tsoliklona nanese se na povećalo tablete, zatim se nanese 1 mala kap ispitivane krvi.

Protresajući tabletu, pomiješajte krv s tsoliklonom. Tijek reakcije promatran je 3 minute. Prisutnost aglutinacije ukazuje na prisutnost Rh faktora.

Krvne grupe.

Krvne grupe- normalni imunogenetski znakovi krvi, omogućujući vam da kombinirate ljude u određene skupine prema

sličnost krvnih antigena.

Poznavanje krvnih grupa temelj je doktrine transfuzije, transplantacije organa i tkiva te sudsko-medicinskog vještačenja.

Antigeni - tvari koje ulaze u organizam parenteralno i izazivaju specifičnu imunološku reakciju, koja se očituje stvaranjem specifičnih protutijela.

Antitijela - proteini globulinske frakcije krvnog seruma, koji nastaju kao odgovor na uvođenje antigena i specifično komuniciraju s antigenima koji su uzrokovali njihovo stvaranje.

Postoji više od 250 izoantigena koji su genetski povezani. U klinici su važni:

1. ABO sustav

3. luteranski

4. Kell-Cellano

AVO sustav.

Početak sustavnog proučavanja krvnih grupa postavljen je Landsteinerovim otkrićem krvnih grupa ABO sustava 1901. godine.

U ovom sustavu ljudski eritrociti su podijeljeni prema principu da imaju tri različita antigenska svojstva: A, B i AB (A + B). Antigenska svojstva "O" ne postoje; u ekstremnom slučaju, možemo govoriti o svojstvu H, međutim, specifičnih antitijela anti - H imaju vrlo mali klinički značaj. Dakle, krvna grupa osobe određena je antigenskim svojstvima crvenih krvnih stanica.

U krvi novorođenčeta, u pravilu, nema antitijela ABO sustava. Tijekom prve godine života dijete razvija antitijela na one antigene kojih nema u vlastitim eritrocitima (izoantigeni, anti-A, anti-B). Nakon toga serum npr. skupine O sadrži antitijela anti-A i anti-B, a serum skupine AB ne sadrži ta antitijela.

Sada je utvrđeno da u crijevima postoje bakterije koje nose iste antigene determinante kao i eritrociti: takozvani heterofilni antigeni. Većina antitijela ABO sustava su tipa

imunoglobulini klase M. S 10 veznih mjesta za antigen, potpuna su protutijela sposobna izazvati aglutinaciju eritrocita.

Nasljeđivanje krvnih grupa.

Diploidni set kromosoma svake osobe sadrži 2 od tri alelna gena - A, B i 0 (H), koji kodiraju svojstva krvnih elemenata.

Pokazalo se da su svojstva A i B dominantna, stoga je krvna grupa 0 fenotipski izražena samo u homozigota. Budući da genotipovi AO i BO mogu dovesti do fenotipa A, odnosno B, roditelji s jednom od ovih krvnih grupa mogu imati dijete s krvnom grupom 0. Alel A i B su u kodominantnom odnosu: ako oba geni su prisutni, svaki od njih se izražava, a ne međusobno djeluju.

Poznavajući ove principe nasljeđivanja, možete dobiti neke informacije o roditeljima, na temelju krvne grupe djeteta. U forenzičkoj praksi opće je prihvaćeno da muškarac s tipom AB ne može biti otac djeteta s krvnom grupom 0. Što se više grupnih faktora uzme u obzir, očinstvo se pouzdanije može isključiti (trenutačno je vjerojatnost od 99 % može se postići).

Krvna grupaALI podijeljeni u podskupine A1 i A2. Glavna razlika između ovih podskupina je u tome što kada se pomiješaju s anti-A serumom, A1 eritrociti aglutiniraju brže i u većoj mjeri od A2. Eritrociti skupine A2 imaju više H-struktura od eritrocita A1. Otprilike 80% osoba s krvnom grupom A pripada podskupini A1, preostalih 20% pripada podskupini A2. Ova podjela nema praktičnog značaja za transfuziju krvi, jer su transfuzijske reakcije između podskupina A1 i A2 blage i rijetke. Geografski raspored krvnih grupa.

Više od 40% stanovnika srednje Europe ima krvnu grupu a, približno 40% - grupu 0; 10% ili više - skupina B i oko 6% - skupina AB. 90% domorodačkog stanovništva Amerike ima grupu 0. Više od 20% stanovništva Srednje Azije ima krvnu grupu in. Na temelju podataka o prisutnosti i omjeru različitih krvnih grupa u raznim dijelovima zemaljske kugle antropolozi mogu zaključivati o podrijetlu i miješanju naroda.

Rhesus sustav (Rh).

Većina Europljana je Rh pozitivna (Rh+). To znači da ako se njihova krv pomiješa sa serumom kunića prethodno imuniziranih eritrocitima rezus makaka, tada će doći do aglutinacije. Ako ne dođe do aglutinacije, krv se smatra Rh negativnom. Prilikom transfuzije Rh-pozitivne krvi Rh-negativnom primatelju, tijekom nekoliko mjeseci u tijelu primatelja postupno se stvaraju aglutinini do Rh + eritrocita. Rh faktor eritrocita.

Interakcija eritrocita s anti-Rh serumom posljedica je prisutnosti nekoliko antigena u različitim dijelovima membrane (nepotpuni antigeni). Najvažniji od njih su C, D, E, c, e. Najizraženija su antigenska svojstva antigena D. Zbog jednostavnosti, krv koja sadrži D-eritrocite naziva se Rh-pozitivna (Rh + ili Rh); a krv bez takvih eritrocita je Rh-negativna (Rh - ili rh); 85% Europljana ima Rh+ krv; 15% - Rh -. Fenotip Rh+ može odgovarati genotipu DD ili Dd; a za Rh fenotip samo dd genotip.

Jedna od razlika između Rhesus i ABO sustava, koja je od velike praktične važnosti, je da su aglutinini ABO sustava uvijek sadržani u ljudskoj krvi nakon prvih mjeseci života, dok se Rh - aglutinini pojavljuju tek nakon senzibilizacije: kontakt s Rh-negativna osoba s Rh-antigenima. Stoga se kod prve transfuzije Rh-inkompatibilne krvi obično ne javlja očita reakcija. Reakcije antigen-protutijelo pojavljuju se samo kod ponovljene transfuzije takve krvi.

Druga razlika između dva sustava je da su većina Rh aglutinina nepotpuna antitijela imunoglobulina klase G, koji su, za razliku od veličine potpunih aglutinina ABO sustava, dovoljno mali da prijeđu placentarnu barijeru.

Rhesus nekompatibilnost i trudnoća. Tijekom trudnoće male količine crvenih krvnih zrnaca mogu prodrijeti iz krvi Rh-pozitivnog fetusa u krv Rh-negativne majke. To dovodi do stvaranja aglutinina protiv Rh + - eritrocita. Obično samo tijekom poroda velika količina (10-15 ml) fetalnih eritrocita ulazi u krv majke. Budući da titar protutijela u krvi majke raste relativno sporo (tijekom nekoliko mjeseci), tijekom prve trudnoće obično nema komplikacija. Međutim, tijekom druge trudnoće Rh-negativne žene s Rh-pozitivnim fetusom, titar antitijela u njezinoj krvi može doseći tako visoku razinu da, kao rezultat prodiranja aglutinina kroz placentu, eritrociti fetusa početi se raspadati. To dovodi do ozbiljnih poremećaja u životu fetusa, pa čak i do intrauterine smrti (fetalna eritroblastoza). Stvaranje protutijela u tijelu Rh-negativne žene može se ograničiti ili potpuno potisnuti tzv. anti-D profilaksom. Ako se odmah nakon poroda (uključujući prijevremeni) ženi ubrizga anti-D-globulin, tada će Rh-pozitivni eritrociti koji su prodrli u njenu krv biti uništeni i time će biti eliminiran faktor koji uzrokuje stvaranje antitijela. imunološki sustav. Reakcije antigen-antitijelo također se mogu pojaviti kada su majka i fetus nekompatibilni zbog drugih grupnih karakteristika (osobito ABO), ali takve su reakcije obično blage.

Transfuzija krvi.

Pravila transfuzije krvi:

1. Transfuzija krvi izogrupe.

2. Određivanje pripadnosti grupi prema ABO sustavu.

3. Određivanje Rh-pripadnosti krvi.

4. Definicija pojedinca kompatibilnost krvi.

5. Provođenje biološkog testa.

Određivanje krvne grupe prema ABO sustavu.

1. Metoda standardni serumi - koriste se standardni serumi prve, druge i treće krvne grupe koji sadrže protutijela odgovarajuće skupine: dakle, antigene određujemo u ispitivanoj krvi.

2. Metoda standardni eritrociti - koriste se standardni eritrociti druge i treće skupine koji sadrže odgovarajuće antigene (A, B); stoga se antitijela određuju u ispitivanoj krvi.

3. Metoda tsolikloni - koriste se anti-A (alfa) zolikloni i

anti-B (beta), to su monoklonska antitijela, određujemo u krvi

antigeni. Određivanje Rh-pripadnosti krvi.

1. metoda serumi protiv rezusa - koristi se antirezus serum koji se slojevito nanosi duž stijenke epruvete, zatim kap krvi, epruveta se mućka nekoliko minuta, zatim se doda kap fiziološke otopine da se isključi lažna aglutinacija. Ako postoji aglutinacija - Rh je pozitivan; u nedostatku aglutinacije - Rh negativan.

2. Metoda tsolikloni - zoliklon anti-D-cynep Određivanje individualne kompatibilnosti krvi,

1. Krv davatelja se miješa sa serumom primatelja. U prisutnosti aglutinacije, krv je nekompatibilna; ako ne, kompatibilan.

2. Krv primatelja se miješa sa serumom davatelja. Razred

rezultati su slični. Provođenje biološkog testa.

Prvih 45 ml krvi transfuzira se frakcijski: nakon 3 minute po 15 ml i prati se stanje bolesnika. Fenomeni nekompatibilnosti:

osjećaj topline u cijelom tijelu, bljedilo kože, mali i česti puls, snižavanje krvnog tlaka; bol u trbuhu, glavi, donjem dijelu leđa; crveno-smeđa mokraća: "mesne pomije".

Postupak određivanja krvnih grupa po ABO sustavu sastoji se u dokazivanju antigena A i B u eritrocitima standardnim antitijelima i korištenju aglutinina u plazmi ili serumu analizirane krvi sa standardnim eritrocitima. Tehnika je razvijena početkom 20. stoljeća i još uvijek se aktivno koristi u medicini. Određivanje antigena A i B provodi se pomoću anti-A i anti-B koliklona.

Osnovni koncepti

U donora se uvijek određuju ne samo antigeni u eritrocitima, već i aglutinini u serumu (plazmi) pomoću standardnih eritrocita. Koristi se kao biomaterijal deoksigenirana krv. Prije studije morate odustati od masne hrane dan prije analize i ne pušiti pola sata prije testa. Krvne grupe određuju se dva puta: prvo u medicinskom odjelu gdje se prikuplja materijal, a zatim se potvrđuju istraživanjem u laboratoriju.

Određivanje krvnih grupa prema ABO sustavu je glavni test koji se koristi u transfuziologiji. Također, neke životinje imaju sličan sustav krvnih grupa, poput čimpanza, gorila i bonoba.

Povijest otkrića

U znanosti je općeprihvaćeno mišljenje da je metodu određivanja krvnih grupa prema ABO sustavu prvi identificirao Karl Landsteiner, austrijski znanstvenik 1900. godine. Zatim je u svom radu opisao tri vrste antigena. Za to mu je trideset godina kasnije dodijeljena Nobelova nagrada za medicinu i fiziologiju. Budući da prije nije bilo bliskih veza među znanstvenicima, kasnije se utvrdilo da je češki serolog Jan Jansky, bez obzira na istraživanja K. Landsteinera, prvi opisao četiri ljudske krvne grupe, ali njegova istraživanja nisu bila poznata široj javnosti. publika. Trenutno se u Rusiji i republikama bivšeg SSSR-a koristi klasifikacija koju je razvio Ya. Jansky. U SAD-u, W. L. Moss stvorio je vlastito slično djelo 1910. godine.

Metoda određivanja krvnih grupa prema ABO sustavu pomoću koliklona

Krvnu grupu treba odrediti u prostoriji s dobrim osvjetljenjem, promatrajući raspon temperature od 15 do 25 stupnjeva Celzijusa, jer odstupanja od ove norme mogu utjecati na rezultate studije. Na pločicu ili pločicu upisuju se inicijali i prezime bolesnika. S lijeva na desno ili u krug primjenjuju se standardne oznake skupina (O (I), A (II), B (III)). Ispod njih se stavlja kap po kap odgovarajući serum posebnim pipetama za svaku vrstu. Zatim im se dodaje krv bolesnika. Materijal za istraživanje uzima se iz ušne školjke ili prsta. To zahtijeva tehnika određivanja krvne grupe prema ABO sustavu.

Također je legitimno koristiti eritrocite koji se nalaze u epruveti nakon stvaranja ugruška. Potrebno je da količina seruma bude deset puta veća od količine dodane krvi. Nakon toga se kapi pomiješaju staklenim štapićima (za svaku zasebno). U roku od pet minuta, lagano tresući ploču, promatrajte pojavu reakcije hemaglutinacije. Ono se očituje u tome što se pojavljuju male crvene kvržice koje se potom spajaju u veće. Serum u ovom trenutku gotovo potpuno gubi boju.

Kako bi se jednostavnom aglutinacijom eritrocita uklonila lažna hemaglutinacija, nakon tri minute dodajte jednu kap fiziološke otopine i provjerite da li aglutinacija traje. Ako da, onda je to istina. Sve, završeno je određivanje krvnih grupa po ABO sustavu.

Interpretacija rezultata

Kao rezultat toga, mogu se uočiti četiri reakcije:

aglutinacija se ne događa ni s jednim od seruma - prva skupina O (I);
reakcija se očitovala sa serumima I(ab) i III(a) - druga skupina A(II);
aglutinacija se javlja sa serumima I(ab) i II(b) - treća skupina B(III);
ako se reakcija dogodi s tri seruma, potrebno je provesti dodatni postupak s reagensima skupine AB(IV), koji su standardni; ako u takvoj kapi nema aglutinacije, možemo pretpostaviti da se radi o 4. krvnoj grupi AB (IV).

Ekspresna metoda za Rh faktor

Metoda određivanja krvnih grupa prema ABO sustavu uključuje istovremeno otkrivanje Rh faktora (Rh).

Površina ploče se prethodno navlaži i na njoj se ispiše "kontrolni serum" i "anti-rezus serum". Zatim se ispod natpisa stavi jedna ili dvije kapi potrebnih reagensa i doda im se analizirani materijal. Za to se može koristiti i krv iz prsta (u istoj količini kolika je zapremina seruma) ili eritrociti preostali na dnu epruvete nakon pojave ugruška (polovica zapremine seruma). Izbor materijala ne utječe na konačni rezultat. Zatim se krv i serum pomiješaju suhim staklenim štapićem, nakon čega se očekuje da reakcija nastupi pet minuta. Kako bi se uklonila lažna očitanja, nakon tri do četiri minute dodaje se izotonična otopina natrijevog klorida (samo nekoliko kapi). Određivanje krvne grupe prema ABO i Rh sustavu provodi se vrlo često.

Ako dođe do aglutinacije crvenih krvnih stanica u kapi seruma, to ukazuje na pozitivan rezus krvi. Prema statistikama, Rh + nalazi se u 85% svjetske populacije. Njegov nedostatak omogućuje nam da govorimo o Rh-negativnoj pripadnosti. Ako se u kontrolnom serumu pojavi aglutinacija, on je postao neupotrebljiv. Nažalost, algoritam za određivanje krvne grupe prema ABO sustavu ne radi uvijek savršeno.

Koje se pogreške mogu učiniti ovom tehnikom?

Netočnosti u određivanju pripadnosti krvi određenoj skupini ovise o sljedećim razlozima:

tehnički.
Biološke specifičnosti ispitivane krvi.
Defektni karakter standardnih seruma i eritrocita.

Tehničke greške

Moguće pogreške u određivanju krvne grupe ABO sustava na križni način:

Pogreške biološke specifičnosti

Pogreške povezane s biološkim specifičnostima analizirane krvi dijele se u dvije vrste.

Ovisno o karakteristikama eritrocita.
Pogreške zbog bioloških karakteristika seruma.

Razmotrimo svaku vrstu detaljnije.

Ovisno o karakteristikama crvenih krvnih stanica

Kasna aglutinacija zbog "slabih" oblika eritrocita i antigena. Kako bi se izbjegle pogreške, krvnu grupu davatelja i primatelja potrebno je odrediti pomoću standardnih eritrocita. Aglutinogen A 2 treba identificirati ponovnim ispitivanjem s drugim vrstama reagensa i drugim staklenim posuđem, povećavajući vrijeme registracije reakcije.
"Panaglutinacija" ("autoaglutinacija") - sposobnost krvi da pokaže istu reakciju nespecifične prirode sa svim serumima, uključujući i vlastiti. Nakon pet minuta, težina takve aglutinacije slabi, iako bi se trebala povećati. Slični slučajevi se opažaju kod bolesnika s rakom, opeklinama itd. Kao kontrolu potrebno je procijeniti manifestaciju aglutinacije analiziranih eritrocita u standardnom serumu četvrte skupine i fiziološkoj otopini. Kod "panaglutinacije" se krvna grupa utvrđuje trostrukim ispiranjem eritrocita. Ako ne da željeni rezultat, vrijedi ponovno uzeti uzorak krvi u epruvetu zagrijanu prije postupka i staviti uzorak u termo spremnik kako bi se održala temperatura od 37 stupnjeva Celzijevih i više. Zatim ga treba dostaviti u laboratorij, gdje se održava gornja temperatura i koriste zagrijana fiziološka otopina, ploča i reagensi.

Ponekad su eritrociti analizirane krvi raspoređeni poput "stupića novčića", pa se mogu zamijeniti za aglutinate. Dodavanjem dvije kapi izotonične fiziološke otopine i laganim protresanjem ploče, crvene krvne stanice su u ispravnom položaju.
Nepotpuna ili mješovita aglutinacija koja se javlja u bolesnika druge, treće i četvrte skupine kao rezultat transplantacije koštane srži ili u prva tri mjeseca nakon transfuzije krvi 0 (I).

Biološki utvrđeni serum

Pogreške povezane s uporabom neispravnih standardnih eritrocita i seruma

Slabi serumi kojima je istekao rok trajanja ili imaju titar manji od 1:32 mogu izazvati slabu i kasnu aglutinaciju. Korištenje takvih reagensa je neprihvatljivo.

Upotreba neprikladnih standardnih eritrocita ili seruma, pripremljenih u nesterilnim uvjetima i nedovoljno konzerviranih, dovodi do pojave "bakterijske" aglutinacije, koja je nespecifične prirode.

Postoje mnoge popularne pretpostavke o krvnim grupama ABO sustava koje su se pojavile odmah nakon njegovog otkrića u različitim kulturama diljem svijeta. Tako je, na primjer, 30-ih godina prošlog stoljeća u Japanu i nekim drugim zemljama postala popularna teorija koja povezuje krvnu grupu s jednim ili drugim tipom osobnosti. Slične teorije su danas popularne.

Postoji i mišljenje da je osoba s grupom A sklona teškom mamurluku, s O dobri zubi, a skupina A2 - s najvišom razinom IQ-a. No takve tvrdnje nisu znanstveno dokazane.

Razmotrili smo određivanje krvnih grupa prema ABO sustavu pomoću standardnih seruma.

Funkcije. Krvne grupe su genetski naslijeđene osobine koje se ne mijenjaju tijekom života u prirodnim uvjetima. Krvna grupa je određena kombinacija površinskih antigena eritrocita (aglutinogena) ABO sustava.Određivanje grupne pripadnosti ima široku primjenu u kliničkoj praksi za transfuziju krvi i njezinih komponenti, u ginekologiji i opstetriciji pri planiranju i vođenju trudnoće. Sustav krvnih grupa AB0 je glavni sustav koji određuje kompatibilnost i nekompatibilnost transfuzirane krvi, jer njegovi sastavni antigeni su najimunogeniji. Značajka AB0 sustava je da u plazmi neimunih ljudi postoje prirodna antitijela na antigen koji je odsutan na eritrocitima. Sustav krvnih grupa AB0 sastoji se od dvije grupe aglutinogena eritrocita (A i B) i dva odgovarajuća antitijela - aglutinina plazme alfa (anti-A) i beta (anti-B). Različite kombinacije antigena i antitijela tvore 4 krvne grupe:

Grupa 0 (I) - grupa aglutinogena nema na eritrocitima, aglutinini alfa i beta prisutni su u plazmi.
Grupa A (II) - eritrociti sadrže samo aglutinogen A, aglutinin beta prisutan je u plazmi;
Grupa B (III) - eritrociti sadrže samo aglutinogen B, plazma sadrži aglutinin alfa;
Grupa AB (IV) - antigeni A i B prisutni su na eritrocitima, plazma ne sadrži aglutinine.

Određivanje krvnih grupa provodi se utvrđivanjem specifičnih antigena i protutijela (dvostruka metoda ili križna reakcija).

Inkompatibilnost krvi uočava se ako eritrociti jedne krvi nose aglutinogene (A ili B), a plazma druge krvi sadrži odgovarajuće aglutinine (alfa ili beta) te dolazi do reakcije aglutinacije.

Potrebno je transfuzirati crvene krvne stanice, plazmu i osobito punu krv od davatelja do primatelja, strogo poštujući kompatibilnost skupina. Kako bi se izbjegla nekompatibilnost krvi davatelja i krvi primatelja, potrebno je laboratorijske metode točno odrediti njihove krvne grupe. Najbolje je transfuzirati krv, eritrocite i plazmu iste skupine koja je određena kod primatelja. U hitnim slučajevima, crvena krvna zrnca grupe 0 (ali ne puna krv!) mogu se transfuzirati primateljima s drugim krvnim grupama; eritrociti skupine A mogu se transfuzirati primateljima krvnih grupa A i AB, a eritrociti davatelja skupine B mogu se transfuzirati primateljima skupine B i AB.

Kartice kompatibilnosti krvnih grupa (aglutinacija je označena znakom +):

Donator krvi

Krv primatelja

Donatorski eritrociti

Krv primatelja

Skupina aglutinogena nalazi se u stromi i membrani eritrocita. Antigeni ABO sustava otkrivaju se ne samo na eritrocitima, već i na stanicama drugih tkiva ili čak mogu biti otopljeni u slini i drugim tjelesnim tekućinama. Razvijaju se na rani stadiji intrauterini razvoj, a novorođenče je već u značajnim količinama. Krv novorođenčadi ima karakteristike vezane uz dob - u plazmi možda još nisu prisutni aglutinini karakteristične skupine, koji se počinju proizvoditi kasnije (konstantno se otkrivaju nakon 10 mjeseci), a određivanje krvne grupe u novorođenčadi u ovom se slučaju provodi samo prisutnošću antigena ABO sustava.

Osim situacija povezanih s potrebom za transfuzijom krvi, određivanje krvne grupe, Rh faktora, kao i prisutnost aloimunih antieritrocitnih protutijela treba provesti u vrijeme planiranja ili tijekom trudnoće kako bi se utvrdila vjerojatnost imunološki sukob između majke i djeteta, koji može dovesti do hemolitička bolest novorođenčadi.

Hemolitička bolest novorođenčadi

Hemolitička žutica novorođenčadi, uzrokovana imunološkim sukobom između majke i fetusa zbog nekompatibilnosti eritrocitnih antigena. Bolest je uzrokovana nekompatibilnošću fetusa i majke za D-Rhesus ili ABO antigene, rjeđe postoji nekompatibilnost za druge Rh-(C, E, c, d, e) ili M-, M-, Kell-, Duffy -, Kidd- antigeni. Bilo koji od ovih antigena (češće D-Rhesus antigen), prodirući u krv Rh-negativne majke, uzrokuje stvaranje specifičnih antitijela u njenom tijelu. Potonji ulaze u krv fetusa kroz placentu, gdje uništavaju odgovarajuće eritrocite koji sadrže antigene.Oni predisponiraju razvoj hemolitičke bolesti novorođenčadi, kršenje propusnosti posteljice, ponovljene trudnoće i transfuzije krvi do žena bez uzimanja u obzir Rh faktor, itd. Uz ranu manifestaciju bolesti, imunološki sukob može uzrokovati prerano rođenje ili pobačaje.

Postoje varijante (slabe varijante) antigena A (u većoj mjeri) i rjeđe antigena B. Što se tiče antigena A, postoje varijante: "jaki" A1 (više od 80%), slabi A2 (manje od 20% ), pa čak i slabiji (A3 , A4, Ah - rijetko). Ovaj teorijski koncept važan je za transfuziju krvi i može izazvati nesreće pri dodjeljivanju davatelja A2 (II) skupini 0 (I) ili davatelja A2B (IV) skupini B (III), budući da slabi oblik antigena A ponekad uzrokuje pogreške u određivanju ABO krvnih grupa. Ispravna definicija slabe varijante antigena A mogu zahtijevati ponovljene studije sa specifičnim reagensima.

Smanjenje ili potpuna odsutnost prirodni aglutinini alfa i beta ponekad se bilježe u stanjima imunodeficijencije:

neoplazme i bolesti krvi - Hodgkinova bolest, multipli mijelom, kronična limfna leukemija;
kongenitalna hipo- i agamaglobulinemija;
kod djece ranoj dobi i kod starijih osoba;
imunosupresivna terapija;
teške infekcije.

Poteškoće u određivanju krvne grupe zbog supresije reakcije hemaglutinacije također nastaju nakon uvođenja nadomjestaka plazme, transfuzije krvi, transplantacije, septikemije itd.

Nasljeđe krvnih grupa

Sljedeći koncepti leže u osnovi obrazaca nasljeđivanja krvnih grupa. U lokusu gena ABO moguće su tri varijante (alela) - 0, A i B, koji se izražavaju autosomno kodominantno. To znači da kod osoba koje su naslijedile gene A i B dolazi do ekspresije produkata oba ova gena, što dovodi do stvaranja fenotipa AB (IV). Fenotip A (II) može biti kod osobe koja je od roditelja naslijedila ili dva gena A, ili gene A i 0. Prema tome, fenotip B (III) - kada nasljeđuje ili dva gena B, ili B i 0. Fenotip 0 ( I) manifestira se nasljeđivanjem dva gena 0. Dakle, ako oba roditelja imaju krvnu grupu II (genotipovi AA ili A0), jedno od njihovih djece može imati prvu grupu (genotip 00). Ako jedan od roditelja ima krvnu grupu A (II) s mogućim genotipom AA i A0, a drugi B (III) s mogućim genotipom BB ili B0 - djeca mogu imati krvnu grupu 0 (I), A (II), B (III ) ili AB (!V).

Hemolitička bolest novorođenčadi (otkrivanje nekompatibilnosti krvi majke i fetusa prema sustavu AB0);
Preoperativna priprema;
Trudnoća (priprema i praćenje trudnica s negativnim Rh faktorom)

Priprema za studij: nije potrebna

Po potrebi (otkrivanje podtipa A2) provodi se dodatno testiranje pomoću specifičnih reagensa.

Rokovi: 1 dan

Rezultat istraživanja:

0 (I) - prva grupa,
A (II) - druga grupa,
B (III) - treća skupina,
AB (IV) - četvrta krvna grupa.

Kada se otkriju podtipovi (slabe varijante) grupnih antigena, rezultat se daje uz odgovarajući komentar, na primjer, "Otkrivena je oslabljena varijanta A2, potreban je individualni odabir krvi."

Rh faktor

Glavni površinski antigen eritrocita Rhesus sustava, po kojem se procjenjuje Rh pripadnost osobe.

Funkcije. Rh antigen – jedan od eritrocitnih antigena Rh sustava, nalazi se na površini eritrocita. Postoji 5 glavnih antigena u Rh sustavu. Glavni (najimunogeniji) antigen je Rh (D), koji se obično naziva Rh faktor. Eritrociti približno 85% ljudi nose ovu bjelančevinu, pa se klasificiraju kao Rh-pozitivni (pozitivni). 15% ljudi ga nema, oni su Rh-negativni (negativni). Prisutnost Rh faktora ne ovisi o pripadnosti skupini prema sustavu AB0, ne mijenja se tijekom života i ne ovisi o vanjskim uzrocima. Pojavljuje se u ranim fazama intrauterinog razvoja, a novorođenče se već nalazi u značajnim količinama. Određivanje Rh pripadnosti krvi koristi se u općoj kliničkoj praksi za transfuziju krvi i njezinih sastojaka, kao iu ginekologiji i opstetriciji u planiranju i vođenju trudnoće.

Inkompatibilnost krvi prema Rh faktoru (Rh-konflikt) tijekom transfuzije krvi opaža se ako eritrociti darivatelja nose Rh-aglutinogen, a primatelj je Rh-negativan. U tom slučaju, Rh-negativni primatelj počinje proizvoditi antitijela usmjerena protiv Rh antigena, što dovodi do uništavanja crvenih krvnih stanica. Potrebno je transfuzirati eritrocite, plazmu, a posebno punu krv od davatelja do primatelja, strogo poštujući kompatibilnost ne samo po krvnoj grupi, već i po Rh faktoru. Prisutnost i titar antitijela na Rh faktor i druga aloimuna antitijela koja su već prisutna u krvi može se odrediti specificiranjem "anti-Rh (titar)" testa.

Određivanje krvne grupe, Rh faktora i prisutnosti aloimunih antieritrocitnih protutijela potrebno je provesti pri planiranju ili tijekom trudnoće kako bi se utvrdila vjerojatnost imunološkog sukoba između majke i djeteta, što može dovesti do hemolitičke bolesti novorođenčeta. Pojava Rh-konflikta i razvoj hemolitičke bolesti novorođenčeta moguća je ako je trudnica Rh-negativna, a fetus Rh-pozitivan. U slučaju da majka ima Rh +, a plod je Rh - negativan, nema opasnosti od hemolitičke bolesti za plod.

Hemolitička bolest fetusa i novorođenčeta- hemolitička žutica novorođenčadi, uzrokovana imunološkim sukobom između majke i fetusa zbog nekompatibilnosti eritrocitnih antigena. Bolest može biti posljedica nekompatibilnosti fetusa i majke za D-Rhesus ili ABO antigene, rjeđe postoji nekompatibilnost za druge Rh-(C, E, c, d, e) ili M-, N-, Kell-, Duffy-, Kidd antigeni (prema statistikama, 98% slučajeva hemolitičke bolesti novorođenčadi povezano je s D - Rh antigenom). Bilo koji od ovih antigena, prodirući u krv Rh-negativne majke, uzrokuje stvaranje specifičnih antitijela u njenom tijelu. Potonji ulaze u krv fetusa kroz placentu, gdje uništavaju odgovarajuće eritrocite koji sadrže antigen. Predispozicija za razvoj hemolitičke bolesti novorođenčadi posteljica propusnost, ponovljene trudnoće i transfuzije krvi ženi bez uzimanja u obzir Rh faktor, itd. Uz ranu manifestaciju bolesti, imunološki sukob može uzrokovati prerano rođenje ili ponovljene pobačaje.

Trenutno postoji mogućnost medicinska prevencija razvoj Rh-sukoba i hemolitičke bolesti novorođenčadi. Sve Rh-negativne žene tijekom trudnoće trebaju biti pod liječničkim nadzorom. Također je potrebno kontrolirati razinu Rh antitijela u dinamici.

Postoji mala kategorija Rh-pozitivnih osoba sposobnih za stvaranje anti-Rh protutijela. To su osobe čije eritrocite karakterizira značajno smanjena ekspresija normalnog Rh antigena na membrani („slabi“ D, Dweak) ili ekspresija promijenjenog Rh antigena (parcijalni D, Dpartial). Ove slabe varijante antigena D u laboratorijskoj praksi spajaju se u skupinu Du čija je učestalost oko 1%.

Primatelji koji sadrže Du antigen trebaju biti klasificirani kao Rh negativni i smiju im se transfuzirati samo Rh negativna krv, budući da normalni D antigen može izazvati imunološki odgovor kod takvih osoba. Donatori s Du antigenom kvalificiraju se kao Rh-pozitivni darivatelji, jer transfuzija njihove krvi može izazvati imunološki odgovor kod Rh-negativnih primatelja, au slučaju prethodne senzibilizacije na D antigen, teške transfuzijske reakcije.

Nasljeđivanje Rh faktora u krvi.

Sljedeći koncepti leže u osnovi obrazaca nasljeđivanja. Gen koji kodira Rh faktor D (Rh) je dominantan, alelni gen d je recesivan (Rh-pozitivne osobe mogu imati genotip DD ili Dd, Rh-negativne osobe mogu imati samo genotip dd). Osoba od svakog roditelja dobiva 1 gen - D ili d, pa su mu moguće 3 varijante genotipa - DD, Dd ili dd. U prva dva slučaja (DD i Dd), krvni test za Rh faktor dat će pozitivan rezultat. Samo s genotipom dd osoba će imati Rh negativnu krv.

Razmotrite neke mogućnosti kombiniranja gena koji određuju prisutnost Rh faktora kod roditelja i djeteta

1) Otac je Rh-pozitivan (homozigot, genotip DD), majka je Rh-negativna (genotip dd). U tom će slučaju sva djeca biti Rh - pozitivna (100% vjerojatnost).
2) Otac je Rh-pozitivan (heterozigot, genotip Dd), majka je Rh-negativna (genotip dd). U ovom slučaju, vjerojatnost rođenja djeteta s negativnim ili pozitivnim Rh jednaka je i iznosi 50%.
3) Otac i majka su heterozigoti za ovaj gen (Dd), oba Rh pozitivna. U ovom slučaju moguće je (s vjerojatnošću od oko 25%) rođenje djeteta s negativnim Rh.

Indikacije za potrebe analize:

Određivanje transfuzijske kompatibilnosti;
Hemolitička bolest novorođenčadi (otkrivanje nekompatibilnosti krvi majke i fetusa prema Rh faktoru);
Preoperativna priprema;
Trudnoća (prevencija Rh-sukoba).

Priprema za studij: nije potrebna.

Materijal za istraživanje: puna krv (sa EDTA)

Metoda određivanja: Filtracija uzoraka krvi kroz gel impregniran monoklonskim reagensima - aglutinacija + gel filtracija (kartice, križna metoda).

Rokovi: 1 dan

Tumačenje rezultata:

Rezultat se daje u obliku:
Rh + pozitivan Rh - negativan
Kada se otkriju slabi podtipovi antigena D (Du), daje se komentar: "otkriven je slab Rh antigen (Du), preporučuje se transfuzija Rh-negativne krvi ako je potrebno."

Anti - Rh (aloimuna antitijela na Rh faktor i druge antigene eritrocita)

Protutijela na klinički najvažnije antigene eritrocita, prvenstveno Rh faktor, ukazuju na senzibilizaciju organizma na te antigene.

Funkcije. Rh antitijela su takozvana aloimuna antitijela. Aloimuna antieritrocitna protutijela (na Rh faktor ili druge antigene eritrocita) pojavljuju se u krvi pod posebnim uvjetima - nakon transfuzije imunološki nekompatibilne krvi davatelja ili tijekom trudnoće, kada fetalni eritrociti koji nose očinske antigene imunološki strane majke prodiru kroz placentu u ženska krv. Neimuni Rh negativni ljudi nemaju antitijela na Rh faktor. U Rh sustavu razlikuje se 5 glavnih antigena, glavni (najimunogeniji) je D (Rh) antigen, koji se obično naziva Rh faktor. Osim antigena Rh sustava, postoji niz klinički važnih antigena eritrocita na koje može doći do senzibilizacije, što uzrokuje komplikacije tijekom transfuzije krvi. Metoda probira krvi na prisutnost aloimunih antieritrocitnih antitijela koja se koristi u INVITRO-u omogućuje, osim antitijela na Rh faktor RH1(D), otkrivanje aloimunih antitijela na druge eritrocitne antigene u ispitivanom serumu.

Gen koji kodira Rh faktor D (Rh) je dominantan, alelni gen d je recesivan (Rh-pozitivne osobe mogu imati genotip DD ili Dd, Rh-negativne osobe mogu imati samo genotip dd). Tijekom trudnoće Rh-negativne žene s Rh-pozitivnim fetusom moguć je razvoj imunološkog sukoba između majke i fetusa na Rh faktoru. Rhesus sukob može dovesti do pobačaja ili razvoja hemolitičke bolesti fetusa i novorođenčadi. Stoga je određivanje krvne grupe, Rh faktora, kao i prisutnost aloimunih antieritrocitnih protutijela potrebno provesti pri planiranju ili tijekom trudnoće kako bi se utvrdila vjerojatnost imunološkog sukoba između majke i djeteta. Pojava Rh konflikta i razvoj hemolitičke bolesti novorođenčeta moguća je ako je trudnica Rh negativna, a fetus Rh pozitivan. Ako je majčin Rh antigen pozitivan, a fetus negativan, sukob Rh faktora se ne razvija. Učestalost razvoja Rh inkompatibilnosti je 1 slučaj na 200-250 rođenih.

Hemolitička bolest fetusa i novorođenčadi - hemolitička žutica novorođenčadi, uzrokovana imunološkim sukobom između majke i fetusa zbog nekompatibilnosti za antigene eritrocita. Bolest je uzrokovana nekompatibilnošću fetusa i majke za D-Rhesus ili ABO- (skupinu) antigena, rjeđe postoji nekompatibilnost za druge Rh-(C, E, c, d, e) ili M-, M-, Kell-, Duffy-, Kidd-antigeni. Bilo koji od ovih antigena (češće D-Rhesus antigen), prodirući u krv Rh-negativne majke, uzrokuje stvaranje specifičnih antitijela u njenom tijelu. Prodor antigena u majčinu cirkulaciju olakšavaju infektivni čimbenici koji povećavaju propusnost posteljice, manje ozljede, krvarenja i druga oštećenja posteljice. Potonji ulaze u krv fetusa kroz placentu, gdje uništavaju odgovarajuće eritrocite koji sadrže antigen. Predispozicija za razvoj hemolitičke bolesti novorođenčadi je kršenje propusnosti posteljice, ponovljene trudnoće i transfuzije krvi ženi bez uzimanja u obzir Rh faktora itd. Uz ranu manifestaciju bolesti, imunološki sukob može izazvati prijevremeni porod ili pobačaj.

Tijekom prve trudnoće s Rh-pozitivnim fetusom kod trudnice s Rh "-", rizik od razvoja Rh-sukoba je 10-15%. Dolazi do prvog susreta majčinog tijela sa stranim antigenom, akumulacija antitijela događa se postupno, počevši od otprilike 7-8 tjedana trudnoće. Rizik od nekompatibilnosti raste sa svakom sljedećom trudnoćom s Rh pozitivnim fetusom, bez obzira kako je završila (inducirani pobačaj, spontani pobačaj ili porođaj, operacija izvanmaternične trudnoće), krvarenjem tijekom prve trudnoće, s ručnim odvajanjem posteljice i također ako se porod provodi kroz carski rez ili praćen značajnim gubitkom krvi. prilikom transfuzije Rh-pozitivne krvi (ako su provedene čak iu djetinjstvu). Ako se naknadna trudnoća razvije s Rh-negativnim fetusom, nekompatibilnost se ne razvija.

Sve trudnice s Rh "-" stavljaju se na poseban račun u antenatalnu kliniku te provoditi dinamičku kontrolu nad razinom Rh antitijela. Prvi put test na antitijela potrebno je napraviti od 8. do 20. tjedna trudnoće, a zatim povremeno kontrolirati titar antitijela: jednom mjesečno do 30. tjedna trudnoće, dva puta mjesečno do 36. tjedna i jednom tjedno do 36. tjedan. Prekid trudnoće u roku kraćem od 6-7 tjedana ne mora dovesti do stvaranja Rh antitijela kod majke. U tom slučaju, tijekom sljedeće trudnoće, ako fetus ima pozitivan Rh faktor, vjerojatnost ponovnog razvoja imunološke nekompatibilnosti bit će 10-15%.

Ispitivanje aloimunih anti-RBC protutijela također je važno u općoj prijeoperativnoj pripremi, osobito za osobe koje su prethodno imale transfuziju krvi.

Indikacije za potrebe analize:

Trudnoća (prevencija Rh-sukoba);
Praćenje trudnica s negativnim Rh faktorom;
pobačaj;
Hemolitička bolest novorođenčadi;
Priprema za transfuziju krvi.

Priprema za studij: nije potrebna.
Materijal za istraživanje: puna krv (sa EDTA)

Metoda određivanja: metoda aglutinacije + gel filtracija (kartice). Inkubacija standardno tipiziranih eritrocita s ispitivanim serumom i filtracija centrifugiranjem smjese kroz gel impregniran polispecifičnim antiglobilinskim reagensom. Aglutinirani eritrociti otkrivaju se na površini gela ili u njegovoj debljini.

Metoda koristi suspenzije eritrocita donora skupine 0(1), tipiziranih prema eritrocitnim antigenima RH1(D), RH2(C), RH8(Cw), RH3(E), RH4(c), RH5(e), KEL1( K), KEL2(k), FY1(Fy a) FY2(Fy b), JK (Jk a), JK2(Jk b), LU1 (Lu a), LU2 (LU b), LE1 (LE a), LE2 (LE b), MNS1(M), MNS2 (N), MNS3 (S), MNS4(s), P1 (P).

Rokovi: 1 dan

Ako se otkriju aloimuna antieritrocitna protutijela, provodi se njihovo polukvantitativno određivanje.
Rezultat se daje u titrima (maksimalno razrjeđenje seruma pri kojem se još uvijek otkriva pozitivan rezultat).

Mjerne jedinice i faktori pretvorbe: U/ml

Referentne vrijednosti: negativne.

Pozitivan rezultat: Senzibilizacija na Rh antigen ili druge antigene eritrocita.

Antigeni plazme (seruma) su određeni kompleksi aminokiselina ili ugljikohidrata na površini proteinskih molekula krvne plazme (seruma).

POJAM KRVNE GRUPE

KRVNA GRUPA je kombinacija normalnih imunoloških i genetskih svojstava krvi koja je nasljedno određena i biološko je svojstvo svakog pojedinca.

Krvne grupe su naslijeđene, formiraju se u 3-4 mjesecu fetalnog razvoja i ostaju nepromijenjene cijeli život. Vjeruje se da krvna grupa osobe uključuje nekoliko desetaka antigena u različitim kombinacijama. Tih kombinacija – krvnih grupa – zapravo može biti nekoliko milijardi. U praksi, isti su samo kod jednojajčanih blizanaca koji imaju isti genotip.

U praktičnoj medicini pojam "krvna grupa", u pravilu, odražava kombinaciju antigena eritrocita ABO sustava i Rh faktora i odgovarajućih antitijela u krvnom serumu.

GRUPA ANTITIJELA

Za svaki poznati antigen pronađena su istoimena antitijela (anti-A, anti-B, anti-Rh, anti-Kell itd.). Antitijela krvne grupe nisu tako trajno svojstvo ljudskog organizma kao antigeni. Samo u sustavu ABO grupa antitijela su normalno urođeno svojstvo krvne plazme. Ova antitijela (aglutinini a i b) stalno su prisutna u ljudskoj plazmi.

Određivanje krvne grupe prema avo sustavu

1. Krvne grupe prema AVO sustavu

Pod pojmom "kompatibilnost" podrazumijeva se kombinacija krvi davatelja i primatelja u smislu antigena i protutijela, koja ne uzrokuje imunološke interakcije.

Ovisno o prisutnosti aglutinogena A i B u eritrocitima, te u serumu odgovarajućih aglutinina a i b, svi se ljudi dijele u četiri skupine:

Grupa O (I) - u eritrocitima nema aglutinogena, u serumu ima aglutinina a i b.

Grupa A (II) - aglutinogen A u eritrocitima, aglutinin b u serumu.

Grupa B (III) - aglutinogen B u eritrocitima, aglutinin a u serumu.

Grupa AB (IV) - u eritrocitima aglutinogeni A i B, u serumu nema aglutinina.

Antigen A nije homogen, postoje dva glavna podtipa: Sukladno tome, skupina A (II) ima dvije podskupine A (P) i A 2 (II), a skupina AB (IV) - AB (IV) i A 2 B (IV).

Grupa antigena B je homogenija, iako su opisane rijetke varijante. Međutim, to nema značajan klinički značaj.

Metoda određivanja krvnih grupa

Krvna grupa prema ABO sustavu određuje se pomoću reakcije aglutinacije. Trenutno se koriste tri metode za određivanje krvnih grupa prema ABO sustavu:

Prema standardnim izohemaglutinirajućim serumima,

Prema standardnim izohemaglutinirajućim serumima i standardnim eritrocitima (križna metoda),

Uz pomoć monoklonskih antitijela (zolikloni anti-A i anti-B).

U planiranoj studiji bolnički liječnik određuje krvnu grupu standardnim izohemaglutinirajućim serumima ili pomoću koliklona, nakon čega šalje krv u serološki laboratorij za provjeru skupine križnom metodom.

Krvna grupa se smatra sigurnom tek kada laboratorij potvrdi podatke koje je dobio bolnički liječnik. Ako se rezultati studija razlikuju, obje studije treba ponoviti.

U hitnim slučajevima (u slučaju krvarenja potrebna je hitna transfuzija krvi) bolnički liječnik sam određuje skupinu (u laboratoriju se radi ponovna provjera, ali naknadno).

ODREĐIVANJE KRVNIH GRUPA NA STANDARDNOM IZOHEMAGLUTINATSKOM SERUMU

Najčešći u kliničkoj i laboratorijskoj praksi.

Bit metode je otkrivanje antigena skupine A i B u ispitivanoj krvi pomoću standardnih izohemaglutinirajućih seruma. Izvodi se u prostoriji s dobrim osvjetljenjem na temperaturi od 15-25 ° C.

a) Potrebna oprema

Standardni izohemaglutinirajući serumi skupina O (I), A (II), B (III) i AB (IV) dvije različite serije. Sirutka bi trebala biti prozirna, bez znakova raspadanja. Radi praktičnosti, standardni hemaglutinirajući serumi različitih skupina obojeni su u određenu boju: O (I) - bezbojna (siva), A (II) - plava, B (III) - crvena, AB (IV) - svijetlo žuta. Treba napomenuti da ove boje prate sve oznake na krvnim pripravcima koji imaju grupnu pripadnost (krv, eritrocitna masa, plazma i dr.).

Bijeli porculanski ili emajlirani tanjuri ili bilo koji drugi mokri tanjuri s oznakama 0(1), A(P), H(W), AB(IV).

Izotonična otopina natrijeva klorida.

Igle, pipete, stakleni štapići (stakla).

b) Tehnika reakcije

1. Standardni izohemaglutinirajući serumi I, II, III skupine nanose se na ploču (ploču) u volumenu od 0,1 ml (jedna velika kap promjera oko 1 cm). Kako bi se izbjegle pogreške, primjenjuju se dvije serije seruma iz svake skupine. Ukupno ima 6 kapi.

2. Šest kapi ispitne krvi veličine glave pribadače od 0,01 ml (mala kap) suhim staklenim štapićem uzastopno se prenese na pločicu u 6 točaka, svaka pored kapi standardnog seruma (količina krvi koju treba testirati) testirane treba biti otprilike 10 puta manja od količine standardnog seruma), zatim ih pažljivo promiješajte staklenim štapićima sa zaobljenim rubovima.

3. Nakon miješanja, povremeno protresite ploču.

Aglutinacija počinje unutar prvih 10-30 sekundi.

4. U one kapi kod kojih je došlo do aglutinacije dodajte jednu kap izotonične otopine natrijevog klorida, nakon čega se ocjenjuje rezultat reakcije.

Uz pozitivnu reakciju, obično unutar prvih 10-30 sekundi, u smjesi se pojavljuju mala crvena zrnca (aglutinati) vidljiva golim okom, koja se sastoje od slijepljenih crvenih krvnih stanica.

Ako su serumi sve tri skupine dali pozitivnu reakciju, to znači da ispitivana krv sadrži oba aglutinogena - A i B i pripada skupini AB(IV). Međutim, u takvim slučajevima, kako bi se isključila nespecifična aglutinacijska reakcija (hladna aglutinacija, panglutinacija, alergija), potrebno je provesti dodatno kontrolno ispitivanje ispitivane krvi sa standardnim izohemaglutinirajućim serumom skupine AB (IV) koji ne sadrži aglutinini. Samo odsutnost aglutinacije u ovoj kapi u prisutnosti aglutinacije u kapima koje sadrže standardne serume skupina 0(1), A(II) i B(III) omogućuje nam da reakciju smatramo specifičnom i pripišemo ispitivanu krv skupina AB 0 (IV).

Treba napomenuti da u prisutnosti slabog podtipa antigena A u ispitivanoj krvi, reakcija aglutinacije s hemaglutinirajućim serumima skupina 0 (1) i B (III) počinje kasnije (na 3-4 minute). Za točna definicija Podtip antigena A zahtijeva dodatnu reakciju s takozvanim anti-A reagensom.

ODREĐIVANJE KRVNIH GRUPA NA STANDARDNOM IZOHEMAGLUTINIRAJUĆEM SERUMU I STANDARDNIM ERITROCITIMA (KRIŽNA METODA)

Metoda se najčešće koristi u serološkim laboratorijima. Bit metode je određivanje prisutnosti ili odsutnosti antigena skupine A i B u ispitivanoj krvi pomoću standardnih izohemaglutinirajućih seruma, kao i antitijela skupine a i b pomoću standardnih eritrocita.

Oprema za reakciju sa standardnim eritrocitima razlikuje se po tome što su za reakciju aglutinacije potrebni standardni eritrociti triju krvnih grupa: 0(1), A(II), B(III).

Standardni eritrociti pripremaju se iz krvi davatelja s prethodno poznatom krvnom grupom, čuvaju se na 4-8°C.

Na označenu pločicu pipetom u šest ćelija nanese se jedna velika kap seruma ispitivane krvi iz epruvete (0,1 ml), a pored njih - jedna mala kap (0,01 ml) standardnih eritrocita grupe 0 ( 1), A (P), V (P) (po dvije serije).

Značajka tumačenja rezultata reakcije sa standardnim eritrocitima je da su eritrociti skupine 0 (1) kontrolni (ne sadrže antigene, što čini specifičnu reakciju aglutinacije s bilo kojim serumom u osnovi nemogućom).

ODREĐIVANJE KRVNIH GRUPA MONOKLONSKIM ANTUTIJELIMA

Za određivanje krvne grupe koriste se monoklonska protutijela za čiju se proizvodnju koristi biotehnologija hibridoma.

Hibridom je stanični hibrid koji nastaje spajanjem stanice tumora koštane srži (mijeloma) s imunološkim limfocitom koji sintetizira specifična monoklonska protutijela. Hibridoma stječe svojstva oba "roditelja": sposobnost neograničenog rasta, što je karakteristično za tumorsku stanicu, i sposobnost sintetiziranja protutijela, koja je svojstvena imunološkom limfocitu.

Razvijeni su standardni reagensi - monoklonska protutijela (MCA): anti-A i anti-B kolikloni, koji se koriste za određivanje aglutinogena eritrocita. Tsoliklons je crveni (anti-A) ili plavi (anti-B) liofilizirani prah koji se razrjeđuje izotoničnom otopinom natrijevog klorida neposredno prije studije.

Anti-A i anti-B solikloni se nanose na bijelu tabletu po jedna velika kap (0,1 ml) pod odgovarajućim oznakama: anti-A ili anti-B. Uz kapi antitijela nanese se jedna mala kap (0,01 ml) ispitivane krvi. Nakon miješanja komponenti, reakcija aglutinacije se promatra 2-3 minute.

ODREĐIVANJE RH FAKTORA

Godine 1940. K. Landsteiner i A. S. Wiener otkrili su potpuno novi antigen u ljudskim eritrocitima koji su nazvali Rh faktor (Rh). Rh faktor je prisutan u krvi 85% ljudi, a 15% ljudi ne sadrži ovaj faktor. Tako je dobio ime po makaku Rhesus, koji ga uvijek ima.

Rh antigeni se klasificiraju kao lipoproteini. Vrlo su aktivni i sposobni potaknuti stvaranje imunoloških protutijela.

Prisutnost Rh antigena otkriva se u ljudskom fetusu počevši od 5-8 tjedana i dobro je izražena u embriju starom 3-4 mjeseca.

Udio:

Donatorski eritrociti	Krv primatelja
Donatorski eritrociti