Gdje se događa formiranje ribosoma? Funkcije ribosoma

Struktura ribosoma: 1 - velika podjedinica; 2 - mala podjedinica.

ribosomi- nemembranske organele, promjera oko 20 nm. Ribosomi se sastoje od dvije podjedinice – velike i male, u koje se mogu razdvojiti. Kemijski sastav ribosoma - proteina i rRNA. rRNA molekule čine 50-63% mase ribosoma i čine njegov strukturni okvir. Postoje dvije vrste ribosoma: 1) eukariotski (sa konstantama sedimentacije cijelog ribosoma - 80S, male podjedinice - 40S, velike - 60S) i 2) prokariotske (odnosno 70S, 30S, 50S).

Ribosomi eukariotskog tipa sadrže 4 rRNA molekule i oko 100 proteinskih molekula, prokariotski tip - 3 rRNA molekule i oko 55 proteinskih molekula. Tijekom biosinteze proteina, ribosomi mogu "raditi" pojedinačno ili se kombinirati u komplekse - poliribosomi (polisomi). U takvim kompleksima oni su međusobno povezani jednom molekulom mRNA. Prokariotske stanice imaju samo ribosome tipa 70S. Eukariotske stanice imaju ribosome tipa 80S (grube ER membrane, citoplazma) i ribosome tipa 70S (mitohondrije, kloroplasti).

Eukariotske podjedinice ribosoma nastaju u nukleolu. Kombinacija podjedinica u cijeli ribosom događa se u citoplazmi, u pravilu, tijekom biosinteze proteina.

Funkcija ribosoma: sastavljanje polipeptidnog lanca (sinteza proteina).

Ribosomi - pojam i vrste. Klasifikacija i značajke kategorije "Ribosom" 2017., 2018.

Bioinženjeri su razvili hibridne ribosome, koji umjesto dva duga lanca rRNA uključuju jednu molekulu koja osigurava "nedjeljivost" organele. Takvi ribosomi mogu podržati sintezu svih proteina potrebnih za bakterijsku stanicu, iako je inicijacija translacije u njima puno sporija nego u običnim ribosomima.

Rezultirajući hibridni ribosomi Ribo-T(s engleskog. vezani- povezana) (slika 1), znanstvenici su nabavili sojeve bakterija koji ne proizvode obične ribosome. Pokazalo se da su hibridi prilično sposobni podržati život bakterija i sintetizirati sve proteine ​​koji su im potrebni. Istina, stopa rasta bakterija koje nose samo hibridne ribosome bila je upola manja od bakterija s običnim ribosomima. A čak su i tu brzinu postigle samo stanice s mutacijom u genu jednog od ribosomskih proteina i poremećenom sintezom navodnog transportera iona magnezija i kobalta. Kao i stopa rasta, stopa sinteze proteina u bakterijama koje nose hibridne ribosome bila je upola manja od normalne stope.

Znanstvenici su odlučili otkriti zašto hibridni ribosomi sporije sintetiziraju proteine. Pokazalo se da su ribosomi s vezanim podjedinicama inhibirani odmah nakon prepoznavanja startnog kodona. To je glavni im je problem ispravno pokretanje prijevoda. Znanstvenici su otkrili da ovaj problem nije povezan s lošijom interakcijom hibridnih ribosoma s inicijacijskim faktorima, jer njihovo dodavanje nije kompenziralo početnu inhibiciju. Dakle, novu verziju ribosoma tek treba detaljnije istražiti i poboljšati.

Hibridni ribosomi, iako ne baš brzo, radili su svoj posao pa su znanstvenici odlučili testirati njihovu podobnost za rad kao neovisna populacija ribosoma. Prvo, ribosomi određene populacije mogu se koristiti za čitanje mRNA s neobičnim početnim signalima. Za to su dobiveni hibridni ribosomi s modificiranim mjestom koje prepoznaje Shine-Dalgarno sekvencu, početnu točku za vezanje bakterijskog ribosoma na RNA. RNK s promijenjenom Shine-Dalgarno sekvencom nisu prepoznali obični stanični ribosomi, ali je njezin produkt pronađen u citoplazmi stanica koje nose posebno modificirane hibridne ribosome. To znači da su samo hibridni ribosomi bili uključeni u sintezu proteina na takvoj matrici, a translacija RNA sa specifičnim signalima može se proučavati bez utjecaja na translaciju drugih mRNA stanice.

Znanstvenici su također dobili modifikaciju hibridnih ribosoma ovisno o antibiotiku. Takvi ribosomi će djelovati ako se u medij doda antibiotik koji blokira normalne ribosome stanice. Antibiotik u takvom sustavu služi kao prekidač koji određuje koji će skup ribosoma biti aktivan. Tako se stanice mogu održavati ili u prirodnom načinu života, ili u uvjetima kada sintetski ribosomi preuzimaju cjelokupnu proizvodnju proteina. Manipuliranjem svojstava jedne populacije ribosoma, moći će se naučiti mnogo više o procesu sinteze proteina.

Književnost

1. Ribosom na djelu;
2. Kako se riješiti RNA u nekoliko minuta;
3. Orelle C., Carlson E.D., Szal T., Florin T., Jewett M.C., Mankin A.S. (2015.). . Priroda. 524 , 119–124;
4. Io S.B. i Gy L.O. (2015.). Sintetička biologija: Ribosomske veze koje se vežu. Priroda. 524 , 45–46..

ribosom- ovo je mala čestica gusta elektronima koju čine međusobno povezane rRNA molekule i proteini koji tvore složeni supramolekularni spoj - ribonukleoproteinski kompleks.

U ribosomima, proteini i rRNA molekule su približno u jednakim omjerima težine. Citoplazmatski ribosomi eukariota sadrže četiri rRNA molekule koje se razlikuju po molekularnoj težini. Broj organela u stanici vrlo je raznolik: tisuće i desetke tisuća. Ribosomi mogu biti povezani s ER ili biti u slobodnom stanju.

Ribosom je složen organski spoj koji tvori kompaktnu organelu sposobnu čitati informacije iz mRNA lanaca i koristiti ih za sintezu polipeptidnih lanaca.

Ribosom dešifrira informacijski kod sadržan u mRNA, koja se sastoji od četiri vrste nukleotida. Tri nukleotida, smještena u različitim sekvencama, nose informaciju o dvadeset aminokiselina. Ribosom, naime, igra ulogu prevoditelja ovih informacija. Taj se zadatak rješava uz pomoć tRNA i enzima koji sintetiziraju polipeptidne lance. Takvi se enzimi nazivaju aminoacil-tRNA sintetaze. Broj aminoacil-tRNA sintetaza određen je raznolikošću aminokiselina, budući da svaka aminokiselina ima svoj enzim. Dakle, svaki ribosom sadrži najmanje 20 vrsta takvih enzima.

Ribosom se sastoji od velike i male podjedinice. Svaka od podjedinica izgrađena je od ribonukleoproteinskog lanca, gdje rRNA stupa u interakciju s posebnim proteinima i tvori tijelo ribosoma. Ribosomi se formiraju u nukleolu ili matriksu mitohondrija. Sinteza polipeptidnih lanaca koju provode ribosomi naziva se translacijom rRNA - to je osnova za stvaranje ribosoma. Mala podjedinica ribosoma sastoji se od jedne rRNA molekule i približno 30 proteina. Velika podjedinica sadrži jednu dugu rRNA i dvije kratke rRNA. Oni su povezani s 45 proteinskih molekula.

tRNA su male molekule koje se sastoje od 70-90 nukleotida, koji su u obliku lista djeteline. tRNA dostavlja aminokiseline ribosomima. Svaka molekula tRNA ima kraj akceptora na koji je vezana aktivirana aminokiselina. Aminokiseline su vezane za slijed od tri nukleotida koji su komplementarni (odgovaraju) nukleotidima kodona u iRNA – antikodonu.

Postoje citoplazmatski (slobodni i vezani) i mitohondrijski ribosomi. Citoplazmatski i mitohondrijski ribosomi značajno se međusobno razlikuju po kemijskom sastavu, veličini i podrijetlu.

Elektronska mikroskopija otkriva i pojedinačne ribosome i njihove komplekse (polisome). Izvan sinteze, podjedinice ribosoma nalaze se odvojeno jedna od druge. Podjedinice se kombiniraju u vrijeme prijevoda informacija iz mRNA. U ovom slučaju, prijevod informacija iz jedne mRNA molekule provodi nekoliko ribosoma (od 5 ... 6 do nekoliko desetina). Takvi ribosomi najčešće tvore takozvane polisome – labavi konglomerat ribosoma smještenih u lancu duž puta mRNA. To vam omogućuje da odjednom sintetizirate nekoliko polipeptidnih lanaca iz jedne molekule mRNA.

Izvan translacije, podjedinice ribosoma mogu se raspasti i rekombinirati. Ovaj proces je u dinamičkoj ravnoteži. Proces prevođenja počinje sastavljanjem aktivnog ribosoma i naziva se inicijacijom translacije. Sastavljen ribosom sadrži aktivna mjesta. Takvi se centri nalaze na kontaktnim površinama obje podjedinice. Između male i velike podjedinice nalazi se niz udubljenja. Ove šupljine sadrže: mRNA, tRNA i sintetizirani peptid (peptidil-tRNA). Zone povezane sa sintetičkim procesima čine sljedeće aktivne centre:

• mRNA vezni centar (M-centar);
• peptidilni centar (P-centar), na kojem se odvija inicijacija i završetak čitanja informacija, a u procesu sinteze polipeptida sadrži polipeptidni lanac;
• aminokiselinski centar (A-centar), mjesto vezanja za sljedeću tRNA;
• centar peptidil transferaze (PTF centar). Ovdje dolazi do katalize sinteze polipeptida i sintetizirana molekula se produžuje za još jednu aminokiselinu.

Na maloj podjedinici je M-centar, glavni dio A-centra i mala površina P-centra. Na velikoj podjedinici nalaze se preostali dijelovi A- i P-centara, kao i PTF centar.

Translacija počinje početnim kodonom, tripletom adenin-uracil-guanin, koji se nalazi na 5' kraju mRNA. Pridružuje se maloj podjedinici na razini P-centra budućeg ribosoma. Kompleks se zatim kombinira s velikom podjedinicom. Taj proces aktiviraju ili, obrnuto, blokiraju proteinski čimbenici. Od trenutka formiranja ribosoma, ribosom se povremeno kreće, triplet za tripletom, duž molekule i RNA, što je popraćeno rastom polipeptidnog lanca. Broj aminokiselina u takvom proteinu jednak je broju tripleta mRNA.

Proces translacije uključuje ciklus bliskih događaja i naziva se elongacija – produljenje peptidnog lanca. Signal za prekid translacije je pojava u mRNA jednog od "besmislenih" kodona (UAA, UAG, UGA). Ove kodone prepoznaje jedan od dva terminska faktora. Aktiviraju aktivnost hidrolaze centra peptidiltransferaze, što je popraćeno cijepanjem nastalog polipeptida, razgradnjom ribosoma na podjedinice i prestankom sinteze.

Slobodni ribosomi su raspoređeni u citoplazmatskom matriksu. Oni su ili u obliku podjedinica i ne sudjeluju u translaciji, ili "čitaju" informacije, tvoreći polipeptidne lance proteina matriksa citoplazme i jezgre, citoskeleta stanice itd.

Vezani ribosomi su oni ribosomi koji su pričvršćeni za membrane gr. EPS ili na vanjsku membranu nuklearne ovojnice. To se događa samo u trenutku sinteze polipeptidnih lanaca proteina koji tvore sekretorne granule citoleme, lizosoma, EPS, Golgijev kompleks itd.

Sinteza proteinskih molekula odvija se kontinuirano i odvija se velikom brzinom: u jednoj minuti nastaje od 50 do 60 tisuća peptidnih veza. U jednoj sekundi, eukariotski ribosom čita informacije od 2 ... 15 kodona (trojki) mRNA. Sinteza jedne molekule velikog proteina (globulina) traje oko 2 minute. Kod bakterija je taj proces mnogo brži.

Dakle, ribosomi su organele koje osiguravaju anaboličke procese u stanici, odnosno sintezu polipeptidnih lanaca proteina.

U slabo specijaliziranim i brzo rastućim stanicama uglavnom se nalaze slobodni ribosomi. U specijaliziranim stanicama ribosomi se nalaze u gr. EPS. Sadržaj RNA i, sukladno tome, stupanj sinteze proteina korelira s brojem ribosoma. To je popraćeno sklonošću citoplazmatskoj bazofiliji, odnosno sposobnošću bojenja osnovnim bojama.

U nekim tipovima stanica, citoplazma je bazofilnija nego u drugih. Bazofilija može biti difuzna ili lokalna. Elektronskim mikroskopom ustanovljeno je da lokalnu bazofiliju stvara gr. EPS, odnosno ribosomi pričvršćeni na njegove membrane. Primjeri takve žarišne bazofilije su: citoplazma neurona, bazalni pol žljezdanog epitela terminalnih dijelova egzokrinog dijela gušterače, stanice žlijezda slinovnica koje proizvode proteine. Difuzna bazofilija je posljedica slobodnih ribosoma. Bazofilija se također otkriva u slučaju nakupljanja u citoplazmi inkluzija ili velikog broja lizosoma s kiselim sadržajem. U tim slučajevima vidljivo je bazofilno bojenje.

Ako pronađete pogrešku, označite dio teksta i kliknite Ctrl+Enter.

U bakterijskoj stanici ribosomi čine do 30% njezine suhe mase: ima otprilike 10 4 ribosoma po bakterijskoj stanici. U eukariotskom stanice (stanice svih organizama, s izuzetkom bakterija i modro-zelenih algi). sadržaj ribosoma je manji, a njihov broj uvelike varira ovisno o aktivnosti sinteze proteina odgovarajućeg tkiva ili pojedine stanice.

U eukariotskom u stanici se svi ribosomi citoplazme (i vezani na membranu i slobodni) formiraju u jezgri; tamo se smatraju neaktivnim. eukariotski stanica također ima posebne ribosome u mitohondrijima (kod životinja i biljaka) i kloroplastima (u biljkama). Ribosomi ovih organela razlikuju se od veličine citoplazme i nekih funkcija. sv. ti. Nastaju izravno u tim organelama.

Postoje dvije osnovne vrsta ribosoma. Svi prokarioti. organizme (bakterije i modrozelene alge) karakteriziraju tzv. 70S ribosomi karakterizirani koef. (stalna) sedimentacija cca. 70 Svedbergovih jedinica, odnosno 70S (prema koeficijentu sedimentacije razlikuju se i ribosomi drugih vrsta, kao i subčestice i biopolimeri koji čine ribosome). Njihova molba. m. je 2,5 10 6, linearne dimenzije 20-25 nm. Prema kem. sastav je ribonukleoproteini; sastoje se samo od rRNA i proteina (omjer ovih komponenti je 2:1). Ribosomska RNA u ribosomima je prisutna hl. arr. u obliku Mg-soli (navodno, djelomično u obliku Ca-soli); magnezija u ribosomima do 2% suhe mase. Osim toga, u dekomp. količina (do 2,5%) kationa amin-spermina H 2 N (CH 2) 3 NH (CH 2) 4 NH (CH 2) 3 NH 2, spermidina H 2 N (CH 2) 3 NH (CH 2) 4 NH 2 itd.

Očigledno, rRNA određuje glavnu. strukturno i funkcionalno. Saint-va ribosomi, posebice, osiguravaju integritet ribosomskih podjedinica, određuju njihov oblik i niz strukturnih značajki. Specifično prostorima. struktura rRNA određuje lokalizaciju svih ribosomskih proteina, igra vodeću ulogu u organizaciji funkcija. centri ribosoma.

Sinteza ribosomskih proteina je proces u više koraka. Prva faza (inicijacija) počinje pričvršćivanjem glasničke RNA (mRNA) na malu ribosomalnu podjedinicu koja nije povezana s velikom podjedinicom. Karakteristično je da je za početak procesa potreban disocirani ribosom. Na formirane tzv. velika ribosomska podjedinica je vezana za inicijacijski kompleks. Specijalisti sudjeluju u fazi inicijacije. inicijacijski kodon (vidi Genetski kod), inicirajući prijenos RNA (tRNA) i specifični. proteini (tzv. inicijacijski čimbenici). Nakon prolaska faze inicijacije, ribosom nastavlja u sukcesiju. očitavanje kodona mRNA u smjeru od kraja 5 "do 3", što je popraćeno sintezom polipeptidnog lanca proteina koji je kodiran ovom mRNA (za više detalja o mehanizmu sinteze polipeptida pogledajte članak Prijevod). U tom procesu ribosom funkcionira kao ciklički radni stup. automobil. Radni ciklus ribosoma tijekom elongacije sastoji se od tri ciklusa: 1) vezanje aminoacil-tRNA ovisno o kodonu (opskrbljuje ribosom aminokiselinama), 2) transpeptidacija-prijenos C-terminusa rastućeg peptida na aminoacil-tRNA , tj. produljenje proteinskog lanca u izgradnji jednom karikom, 3) translokacija-pomicanje šablona (mRNA) i peptidil-tRNA u odnosu na ribosom i prijelaz ribosoma u prvobitno stanje, kada može percipirati trag. aminoacil-tRNA. Kad ribosom dosegne specijal

Ribosom (od "RNA" i soma - tijelo) je stanična nemembranska organela koja obavlja translaciju (čitanje mRNA koda i sintetiziranje polipeptida).

Eukariotski ribosomi nalaze se na membranama endoplazmatskog retikuluma (granularni ER) i u citoplazmi. Ribosomi pričvršćeni na membrane sintetiziraju proteine ​​"za izvoz", a slobodni ribosomi - za potrebe same stanice. Postoje 2 glavne vrste ribosoma - prokariotski i eukariotski. Mitohondriji i kloroplasti također sadrže ribosome koji su bliski onima u prokariota.

Ribosom se sastoji od dvije podjedinice, velike i male. U prokariotskim stanicama označene su kao 50S i 30S podjedinice, u eukariotskim stanicama 60S i 40S. (S je koeficijent koji karakterizira brzinu sedimentacije podjedinice tijekom ultracentrifugiranja). Podjedinice eukariotskih ribosoma nastaju samosastavljanjem u nukleolu i ulaze u citoplazmu kroz pore jezgre.

Ribosomi u eukariotskim stanicama sastoje se od četiri lanca RNA (tri rRNA molekule u velikoj podjedinici i jedne rRNA molekule u maloj podjedinici) i oko 80 različitih proteina, tj. oni su složeni kompleks molekula koji se drže zajedno slabim, nekovalentnim vezama . (Ribosomi u prokariotskim stanicama sastoje se od tri lanca RNA; dva lanca rRNA su u velikoj podjedinici i jedan rRNA u maloj podjedinici.) Proces translacije (biosinteza proteina) počinje sastavljanjem aktivnog ribosoma. Taj se proces naziva pokretanjem prijevoda. Sklapanje se događa na strogo uređen način, što osiguravaju funkcionalni centri ribosoma. Svi centri nalaze se na kontaktnim površinama obje podjedinice ribosoma. Svaki ribosom radi kao veliki biokemijski stroj, točnije, kao superenzim, koji, prvo, ispravno usmjerava sudionike (mRNA i tRNA) u odnosu jedan prema drugome, a drugo, katalizira reakcije između aminokiselina.

Aktivna mjesta ribosoma:

1) vezni centar mRNA (M-centar);

2) peptidilni centar (P-centar). Početna tRNA se veže na ovaj centar na početku procesa translacije; u kasnijim fazama translacije, tRNA se pomiče iz A centra u centar P, držeći sintetizirani dio peptidnog lanca;

3) aminokiselinski centar (A-centar) - mjesto vezanja kodona mRNA na antikodon tRNA koji nosi sljedeću aminokiselinu.

4) centar peptidil transferaze (PTF centar): katalizira reakciju vezanja aminokiselina. U tom slučaju nastaje još jedna peptidna veza, a rastući peptid se produžuje za jednu aminokiselinu.

Shema sinteze proteina na ribosomima granularnog endoplazmatskog retikuluma.

(sl. iz knjige biologija stanice, svezakII)

Shematski prikaz poliribosoma. Sinteza proteina počinje vezanjem male podjedinice, na mjestu KOLOVOZ-kodon u informacijskoj molekuli (messenger RNA) (sl. iz knjige biologija stanice, volumenII).

Endoplazmatski retikulum

Endoplazmatski retikulum (sin. endoplazmatski retikulum) – organela eukariotske stanice. U stanicama različitih tipova iu različitim funkcionalnim stanjima ova stanična komponenta može izgledati drugačije, ali u svim slučajevima to je labirintna proširena zatvorena membranska struktura izgrađena od komunikacijskih cjevastih šupljina i vrećica zvanih cisterne. Izvan membrana endoplazmatskog retikuluma nalazi se citosol (hijaloplazma, glavna tvar citoplazme), a lumen endoplazmatskog retikuluma je zatvoreni prostor (kompartment) koji putem vezikula (transportnih vezikula) komunicira s Golgijevim kompleksom i okoliš izvan stanice. Endoplazmatski retikulum je podijeljen u dvije funkcionalno različite strukture: grubi (grubi) endoplazmatski retikulum i glatki (agranularni) endoplazmatski retikulum.

Zrnati endoplazmatski retikulum, u stanicama koje luče proteine, predstavljen je sustavom brojnih ravnih membranskih spremnika s ribosomima na vanjskoj površini. Kompleks membrana granularnog endoplazmatskog retikuluma povezan je s vanjskom membranom ljuske jezgre i perinuklearnom (perinuklearnom) cisternom.

U granularnom endoplazmatskom retikulumu sintetiziraju se proteini i lipidi za sve stanične membrane, sintetiziraju se enzimi lizosoma, a sintetiziraju se izlučeni proteini, t.j. za egzocitozu. (Ostatak proteina sintetizira se u citoplazmi na ribosomima koji nisu povezani s ES membranama.) U lumenu granularnog ES, protein je okružen membranom, a rezultirajuće vezikule se odvajaju (pupolje) od ribosomskih -slobodne ES regije, koje isporučuju sadržaj u drugu organelu - Golgijev kompleks - spajanjem sa svojom membranom.

Taj dio ES, na čijim membranama nema ribosoma, naziva se glatki endoplazmatski retikulum. Glatki endoplazmatski retikulum ne sadrži spljoštene cisterne, već je sustav anastomozirajućih membranskih kanala

ov, mjehurića i tubula. Glatka mreža je nastavak granularne, ali ne sadrži riboforine, glikoproteinske receptore, na koje je vezana velika podjedinica ribosoma i stoga nije povezana s ribosomima.

Funkcije glatkog endoplazmatskog retikuluma su raznolike i ovise o vrsti stanice. Glatki endoplazmatski retikulum uključen je u metabolizam steroida, na primjer, spolnih hormona. Kontrolirani kalcijevi kanali i energetski ovisne kalcijeve pumpe lokalizirani su u njegovim membranama. Cisterne glatkog endoplazmatskog retikuluma specijalizirane su za akumulaciju Ca 2+ u njima stalnim ispumpavanjem Ca 2+ iz citosola. Slični depoi Ca 2+ postoje u skeletnim i srčanim mišićima, neuronima, jajnoj stanici, endokrinim stanicama itd. Različiti signali (primjerice, hormoni, neurotransmiteri, faktori rasta) utječu na staničnu aktivnost mijenjajući koncentraciju unutarstaničnog medijatora Ca 2+. U glatkom endoplazmatskom retikulumu jetrenih stanica neutraliziraju se štetne tvari (na primjer acetaldehid nastao iz alkohola), metabolička transformacija lijekova, stvaranje većine lipida u stanicama i njihovo nakupljanje, na primjer, u masnoj degeneraciji. ES šupljina sadrži mnogo različitih komponentnih molekula. Među njima veliku važnost imaju proteini chaperone.

Chaperones(engleska slova - starija dama koja prati mladu djevojku na balove) - obitelj specijaliziranih intracelularnih proteina koji osiguravaju brzo i ispravno savijanje (sklapanje) novosintetiziranih proteinskih molekula. Vezivanje na šaperone sprječava agregaciju s drugim proteinima i tako stvara uvjete za stvaranje sekundarnih i tercijalnih struktura rastućeg peptida. Chaperoni pripadaju trima proteinskim obiteljima, tzv. proteinima toplinskog šoka ( hsp 60, hsp 70, hsp90). Sinteza ovih proteina aktivira se pod mnogim stresovima, posebice tijekom toplinskog šoka (otuda nazivh eart shaok protein - protein toplinskog šoka, a broj označava njegovu molekularnu težinu u kilodaltonima). Ovi chaperoni sprječavaju denaturaciju proteina pod visokim temperaturama i drugim ekstremnim uvjetima. Vezivanjem na abnormalne proteine ​​obnavljaju svoju normalnu konformaciju i time povećavaju stopu preživljavanja organizma u slučaju naglog pogoršanja fizikalno-kemijskih parametara okoliša.